比特派錢包最新版app下載|培養(yǎng)基種類
比特派錢包最新版app下載|培養(yǎng)基種類
- 作者: 比特派錢包最新版app下載
- 2024-03-08 02:29:11
培養(yǎng)基_百度百科
百度百科 網(wǎng)頁新聞貼吧知道網(wǎng)盤圖片視頻地圖文庫資訊采購(gòu)百科百度首頁登錄注冊(cè)進(jìn)入詞條全站搜索幫助首頁秒懂百科特色百科知識(shí)專題加入百科百科團(tuán)隊(duì)權(quán)威合作下載百科APP個(gè)人中心培養(yǎng)基[péi yǎng jī]播報(bào)討論上傳視頻供微生物、植物和動(dòng)物組織生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)收藏查看我的收藏0有用+10本詞條由“科普中國(guó)”科學(xué)百科詞條編寫與應(yīng)用工作項(xiàng)目 審核 。培養(yǎng)基，是指供給微生物、植物或動(dòng)物（或組織）生長(zhǎng)繁殖的，由不同營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽（包括微量元素）、維生素和水等幾大類物質(zhì)。培養(yǎng)基既是提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。培養(yǎng)基種類很多，根據(jù)配制原料的來源可分為自然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基；根據(jù)物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基；根據(jù)培養(yǎng)功能可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等；根據(jù)使用范圍可分為細(xì)菌培養(yǎng)基、放線菌培養(yǎng)基、酵母菌培養(yǎng)基、真菌培養(yǎng)基等。培養(yǎng)基配成后一般需測(cè)試并調(diào)節(jié)pH，還須進(jìn)行滅菌，通常有高溫滅菌和過濾滅菌。培養(yǎng)基由于富含營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，易被污染或變質(zhì)。配好后不宜久置，最好現(xiàn)配現(xiàn)用。 [1]中文名培養(yǎng)基外文名Medium作????用供微生物、植物和動(dòng)物組織生長(zhǎng)成????分水、氮源、無機(jī)鹽、碳源等保存方法防潮、避光、陰涼處保存保存溫度2-25℃特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)維生素、氨基酸、堿基等目錄1簡(jiǎn)介2培養(yǎng)基的配制3配置原則4分類?化學(xué)分類?物理分類?培養(yǎng)功能分類5常見培養(yǎng)基?細(xì)菌培養(yǎng)基?放線菌培養(yǎng)基?微藻培養(yǎng)基?真菌培養(yǎng)基?食用菌菌種培養(yǎng)基?煙草的培養(yǎng)基?動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基6特殊培養(yǎng)基7鑒別培養(yǎng)基8天然培養(yǎng)基9培養(yǎng)基配制10制備基本方法11注意事項(xiàng)簡(jiǎn)介播報(bào)編輯培養(yǎng)基培養(yǎng)基（Medium）是供微生物、植物和動(dòng)物組織生長(zhǎng)和維持用的人工配制的養(yǎng)料，一般都含有水、氮源、無機(jī)鹽（包括微量元素）、碳源、生長(zhǎng)因子（維生素、氨基酸、堿基、抗菌素、色素、激素和血清等）等。培養(yǎng)基由于配制的原料不同，使用要求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后，易被細(xì)菌污染或分解變質(zhì)，因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對(duì)一些需嚴(yán)格滅菌的培養(yǎng)基（如組織培養(yǎng)基），較長(zhǎng)時(shí)間的貯存，必須放在3-6℃的冰箱內(nèi)。由于液體培養(yǎng)基不易長(zhǎng)期保管，均改制成粉末。培養(yǎng)基的配制播報(bào)編輯1.配料配方換算→在容器中加入少量水（蒸餾水，自然水）→按照配方稱取各種藥品（依次加入）→加足所需水量（一藥一勺，取藥后立即蓋上瓶蓋）。2.溶解淀粉溶解：少量冷水調(diào)成糊狀加熱溶解，特別是加有瓊脂的培養(yǎng)基，一定要煮沸，瓊脂的熔解溫度95-97℃ ，且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。3.調(diào)PH用1N的鹽酸或1N的 NaOH把培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到所要求的值。4.過濾濾紙或棉花進(jìn)行過濾。（有時(shí)可以省去）5.分裝一般培養(yǎng)基放在三角瓶或試管中滅菌使用。（1）三角瓶若作靜置培養(yǎng)，則100ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶，最多不能超過150ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶，否則滅菌時(shí)培養(yǎng)基沸騰容易污染棉塞，造成染菌；若作搖瓶培養(yǎng)，則15-20ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶，保證通氣良好。（2）試管分裝液體培養(yǎng)基一般裝4-5ml，約試管的1/4高度；固體斜面培養(yǎng)基一般裝3-4ml，約試管的1/5高度。6.包扎分裝好后，塞上棉塞，在用牛皮紙將棉塞包裹好，防止滅菌時(shí)水份進(jìn)入把棉塞弄濕。7.滅菌按配方上要求的溫度、壓力進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高，營(yíng)養(yǎng)成分會(huì)被破壞，培養(yǎng)基中的糖、氨基酸會(huì)使培養(yǎng)基的顏色變深。8.擺斜面滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放，使其凝固成為一個(gè)斜面，約占試管長(zhǎng)度的1/2。9.貯存培養(yǎng)基在30℃下放置一天，無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用。配置原則播報(bào)編輯1、選擇適宜的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)總體而言，所有微生物生長(zhǎng)繁殖均需要培養(yǎng)基含有碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子、水及能源，但由于微生物營(yíng)養(yǎng)類型復(fù)雜，不同微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求是不一樣的，因此首先要根據(jù)不同微生物的營(yíng)養(yǎng)需求配制針對(duì)性強(qiáng)的培養(yǎng)基。自養(yǎng)型微生物能從簡(jiǎn)單的無機(jī)物合成自身需要的糖類、脂類、蛋白質(zhì)、核酸、維生素等復(fù)雜的有機(jī)物，因此培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基完全可以（或應(yīng)該）由簡(jiǎn)單的無機(jī)物組成。例如，培養(yǎng)化能自養(yǎng)型的氧化硫硫桿菌（Thiobacillus thiooxdans）的培養(yǎng)基組成見表3.9。在該培養(yǎng)基配制過程中并未專門加入其他碳源物質(zhì)，而是依靠空氣中和溶于水中的CO2為氧化硫硫桿菌提供碳源。就微生物主要類型而言，有細(xì)菌、放線菌、酵母菌、霉菌、原生動(dòng)物、藻類及病毒之分，培養(yǎng)它們所需的培養(yǎng)基各不相同。在實(shí)驗(yàn)室中常用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（或簡(jiǎn)稱普通肉湯培養(yǎng)基）培養(yǎng)細(xì)菌，用高氏I號(hào)合成培養(yǎng)基培養(yǎng)放線菌，培養(yǎng)酵母菌一般用麥芽汁培養(yǎng)基，培養(yǎng)霉菌則一般用查氏合成培養(yǎng)基。2、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度及配比合適培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度合適時(shí)微生物才能生長(zhǎng)良好，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度過低時(shí)不能滿足微生物正常生長(zhǎng)所需，濃度過高時(shí)則可能對(duì)微生物生長(zhǎng)起抑制作用，例如高濃度糖類物質(zhì)、無機(jī)鹽、重金屬離子等不僅不能維持和促進(jìn)微生物的生長(zhǎng)，反而起到抑菌或殺菌作用。另外，培養(yǎng)基中各營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)之間的濃度配比也直接影響微生物的生長(zhǎng)繁殖和（或）代謝產(chǎn)物的形成和積累，其中碳氮比（C/N）的影響較大。嚴(yán)格地講，碳氮比指培養(yǎng)基中碳元素與氮元素的物質(zhì)的量比值，有時(shí)也指培養(yǎng)基中還原糖與粗蛋白之比。例如，在利用微生物發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸的過程中，培養(yǎng)基碳氮比為4/1時(shí)，菌體大量繁殖，谷氨酸積累少；當(dāng)培養(yǎng)基碳氮比為3/1時(shí)，菌體繁殖受到抑制，谷氨酸產(chǎn)量則大量增加。再如，在抗生素發(fā)酵生產(chǎn)過程中，可以通過控制培養(yǎng)基中速效氮（或碳）源與遲效氮（或碳）源之間的比例來控制菌體生長(zhǎng)與抗生素的合成協(xié)調(diào)。3、控制pH條件培養(yǎng)基的pH必須控制在一定的范圍內(nèi)，以滿足不同類型微生物的生長(zhǎng)繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物。各類微生物生長(zhǎng)繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的最適pH條件各不相同，一般來講，細(xì)菌與放線菌適于在pH7-7.5范圍內(nèi)生長(zhǎng)，酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范圍內(nèi)生長(zhǎng)。值得注意的是，在微生物生長(zhǎng)繁殖和代謝過程中，由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被分解利用和代謝產(chǎn)物的形成與積累，會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基pH發(fā)生變化，若不對(duì)培養(yǎng)基pH條件進(jìn)行控制，往往導(dǎo)致微生物生長(zhǎng)速度下降或（和）代謝產(chǎn)物產(chǎn)量下降。因此，為了維持培養(yǎng)基pH的相對(duì)恒定，通常在培養(yǎng)基中加入pH緩沖劑，常用的緩沖劑是一氫和二氫磷酸鹽（如KH2PO4和K2HPO4）組成的混合物。K2HPO4溶液呈堿性，KH2PO4溶液呈酸性，兩種物質(zhì)的等量混合溶液的pH為6.8。當(dāng)培養(yǎng)基中酸性物質(zhì)積累導(dǎo)致H+濃度增加時(shí)，H+與弱堿性鹽結(jié)合形成弱酸性化合物，培養(yǎng)基pH不會(huì)過度降低；如果培養(yǎng)基中OH-濃度增加，OH-則與弱酸性鹽結(jié)合形成弱堿性化合物，培養(yǎng)基pH也不會(huì)過度升高。但KH2PO4和K2HPO4緩沖系統(tǒng)只能在一定的pH范圍內(nèi)（6.4-7.2）起調(diào)節(jié)作用。有些微生物，如乳酸菌能大量產(chǎn)酸，上述緩沖系統(tǒng)就難以起到緩沖作用，此時(shí)可在培養(yǎng)基中添加難溶的碳酸鹽（如CaCO3）來進(jìn)行調(diào)節(jié)，CaCO3難溶于水，不會(huì)使培養(yǎng)基pH過度升高，但它可以不斷中和微生物產(chǎn)生的酸，同時(shí)釋放出CO2，將培養(yǎng)基pH控制在一定范圍內(nèi)。在培養(yǎng)基中還存在一些天然的緩沖系統(tǒng)，如氨基酸、肽、蛋白質(zhì)都屬于兩性電解質(zhì)，也可起到緩沖劑的作用。4、控制氧化還原電位（redox potential）不同類型微生物生長(zhǎng)對(duì)氧化還原電位（F）的要求不一樣，一般好氧性微生物在F值為+0.1V以上時(shí)可正常生長(zhǎng)，一般以+0.3—+0.4V為宜，厭氧性微生物只能在F值低于+0.1V條件下生長(zhǎng)，兼性厭氧微生物在F值為+0.1V以上時(shí)進(jìn)行好氧呼吸，在+0.1V以下時(shí)進(jìn)行發(fā)酵。F值與氧分壓和pH有關(guān)，也受某些微生物代謝產(chǎn)物的影響。在pH相對(duì)穩(wěn)定的條件下，可通過增加通氣量（如振蕩培養(yǎng)、攪拌）提高培養(yǎng)基的氧分壓，或加入氧化劑，從而增加F值；在培養(yǎng)基中加入抗壞血酸、硫化氫、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫蘇糖醇等還原性物質(zhì)可降低F值。5、原料來源的選擇在配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)盡量利用廉價(jià)且易于獲得的原料作為培養(yǎng)基成分，特別是在發(fā)酵工業(yè)中，培養(yǎng)基用量很大，利用低成本的原料更體現(xiàn)出其經(jīng)濟(jì)價(jià)值。例如，在微生物單細(xì)胞蛋白的工業(yè)生產(chǎn)過程中，常常利用糖蜜（制糖工業(yè)中含有蔗糖的廢液）、乳清（乳制品工業(yè)中含有乳糖的廢液）、豆制品工業(yè)廢液及黑廢液（造紙工業(yè)中含有戊糖和己糖的亞硫酸紙漿）等都可作為培養(yǎng)基的原料。再如，工業(yè)上的甲烷發(fā)酵主要利用廢水、廢渣作原料，而在我國(guó)農(nóng)村，已推廣利用人畜糞便及禾草為原料發(fā)酵生產(chǎn)甲烷作為燃料。另外，大量的農(nóng)副產(chǎn)品或制品，如鼓皮、米糠、玉米漿、酵母浸膏、酒糟、豆餅、花生餅、蛋白胨等都是常用的發(fā)酵工業(yè)原料。6、滅菌處理要獲得微生物純培養(yǎng)，必須避免雜菌污染，因此對(duì)所用器材及工作場(chǎng)所進(jìn)行消毒與滅菌。對(duì)培養(yǎng)基而言，更是要進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌。對(duì)培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌，一般培養(yǎng)基用1.05kg/cm2，121.3℃條件下維持15-30min可達(dá)到滅菌目的。在高壓蒸汽滅菌過程中，長(zhǎng)時(shí)間高溫會(huì)使某些不耐熱物質(zhì)遭到破壞，如使糖類物質(zhì)形成氨基糖、焦糖，因此含糖培養(yǎng)基常在0.56kg/cm2，112.6℃15-30分鐘進(jìn)行滅菌，某些對(duì)糖類要求較高的培養(yǎng)基，可先將糖進(jìn)行過濾除菌或間歇滅菌，再與其他已滅菌的成分混合；長(zhǎng)時(shí)間高溫還會(huì)引起磷酸鹽、碳酸鹽與某些陽離子（特別是鈣、鎂、鐵離子）結(jié)合形成難溶性復(fù)合物而產(chǎn)生沉淀，因此，在配制用于觀察和定量測(cè)定微生物生長(zhǎng)狀況的合成培養(yǎng)基時(shí)，常需在培養(yǎng)基中加入少量螯合劑，避免培養(yǎng)基中產(chǎn)生沉淀，常用的螯合劑為乙二胺四乙酸（EDTA）。還可以將含鈣、鎂、鐵等離子的成分與磷酸鹽、碳酸鹽分別進(jìn)行滅菌，然后再混合，避免形成沉淀；高壓蒸汽滅菌后，培養(yǎng)基pH會(huì)發(fā)生改變（一般使pH降低），可根據(jù)所培養(yǎng)微生物的要求，在培養(yǎng)基滅菌前后加以調(diào)整。在配制培養(yǎng)基過程中，泡沫的存在對(duì)滅菌處理極不利，因?yàn)榕菽械目諝庑纬筛魺釋樱古菽形⑸镫y以被殺死。因而有時(shí)需要在培養(yǎng)基中加入消泡沫劑以減少泡沫的產(chǎn)生，或適當(dāng)提高滅菌溫度。分類播報(bào)編輯化學(xué)分類1．天然培養(yǎng)基：天然培養(yǎng)基是指一類利用動(dòng)物、植物或微生物體包括其提取物制成的培養(yǎng)基。例如。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基和LB培養(yǎng)基等。常用的天然有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括豆芽汁、玉米粉、土壤浸液、麩皮、牛奶、血清、椰子汁等。天然培養(yǎng)基成本較低，除在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常使用外，也適于用來進(jìn)行工業(yè)上大規(guī)模的微生物發(fā)酵生產(chǎn)。2．組合培養(yǎng)基：合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分，用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計(jì)而配制的培養(yǎng)基。例如，高氏1號(hào)培養(yǎng)基和查氏培養(yǎng)基等。合成培養(yǎng)基有一定的配方，配制合成培養(yǎng)基時(shí)重復(fù)性強(qiáng)，但與天然培養(yǎng)基相比其成本較高，微生物在其中生長(zhǎng)速度較慢，一般適于在實(shí)驗(yàn)室用來進(jìn)行有關(guān)微生物營(yíng)養(yǎng)需求、代謝、分類鑒定、生物量測(cè)定、菌種選育及遺傳分析等方面的研究工作。 [2]3．半組合培養(yǎng)基：指一類主要以化學(xué)試劑配制，同時(shí)還加有某種或某些天然成分的培養(yǎng)基。例如，馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基。物理分類固體培養(yǎng)基1．液體培養(yǎng)基：80%～90%是水，其中配有可溶性的或不溶性的營(yíng)養(yǎng)成分的培養(yǎng)基。2．固體培養(yǎng)基：一類配制成的固體狀態(tài)的基質(zhì)。根據(jù)性質(zhì)又分為固化培養(yǎng)基、非可逆性固化培養(yǎng)基、天然固態(tài)培養(yǎng)基、濾膜。3．半固體培養(yǎng)基：指在液體培養(yǎng)基中加入少量的凝固劑而配制成的半固體狀態(tài)的培養(yǎng)基。4．脫水培養(yǎng)基：又稱預(yù)制干燥培養(yǎng)基，指含有除水分外的一切成分的商品培養(yǎng)基。培養(yǎng)功能分類選擇性培養(yǎng)基：一類根據(jù)某微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基，具有使混合菌樣中的劣勢(shì)菌變成優(yōu)勢(shì)菌的功能，廣泛用于菌種篩選等領(lǐng)域。鑒別培養(yǎng)基：一類在成分中加有能與目的菌的無色代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)的指示劑，從而達(dá)到只須用肉眼辨別顏色就能方便的從近似菌落中找出目的菌菌落的培養(yǎng)基。例如，伊紅美藍(lán)乳糖培養(yǎng)基（EMB）。常見培養(yǎng)基播報(bào)編輯細(xì)菌培養(yǎng)基（1）牛肉膏瓊脂培養(yǎng)基牛肉膏0.3g ，蛋白胨1.0g，氯化鈉0.5g，瓊脂1.5g，水100ml在燒杯內(nèi)加水100ml，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化鈉，用蠟筆在燒杯外作上記號(hào)后，放在火上加熱。待燒杯內(nèi)各組分溶解后，加入瓊脂，不斷攪拌以免粘底。等瓊脂完全溶解后補(bǔ)足失水，用10%鹽酸或10%的氫氧化鈉調(diào)整pH值到7.2-7.6，分裝在各個(gè)試管里，加棉花塞，用高壓蒸汽滅菌：1.05千克每平方厘米、121攝氏度維持15-30分鐘。（2）牛心培養(yǎng)基細(xì)菌培養(yǎng)基取新鮮牛心（除去脂肪和血管）250克，用刀細(xì)細(xì)剁成肉末后，加入500毫升蒸餾水和5克蛋白胨。在燒杯上做好記號(hào)，煮沸，轉(zhuǎn)用文火燉2小時(shí)。過濾，濾出的肉末干燥處理，濾液pH值調(diào)到7.5左右。每支試管內(nèi)加入10毫升肉湯和少量碎末狀的干牛心，滅菌，備用。（3）根瘤菌培養(yǎng)基葡萄糖10g，磷酸氫二鉀0.5g，碳酸鈣3g，硫酸鎂0.2g，酵母粉0.4瓊脂20g，水1000ml，1%結(jié)晶紫溶液1ml。先把瓊脂加水煮沸溶解，然后分別加入其他組分，攪拌使溶解后，分裝，滅菌，備用。放線菌培養(yǎng)基（1）淀粉硝酸鹽培養(yǎng)基（高氏一號(hào)培養(yǎng)基）可溶性淀粉2.0g，硝酸鉀0.1g，磷酸氫二鉀0.05g，氯化鈉0.05g，硫酸鎂0.05g，硫酸亞鐵0.001g，瓊脂2g，水100ml。先把淀粉放在燒杯里，用5ml水調(diào)成糊狀后，倒入95ml水，攪勻后加入其他藥品，使它溶解。在燒杯外做好記號(hào)，加熱到煮沸時(shí)加入瓊脂，不停攪拌，待瓊脂完全溶解后，補(bǔ)足失水。調(diào)整pH值到7.2-7.4，分裝后滅菌，備用。（2）面粉瓊脂培養(yǎng)基面粉60g，瓊脂20g，水1000ml把面粉用水調(diào)成糊狀，加水到500ml，放在文火上煮30分鐘。另取500ml水，放入瓊脂，加熱煮沸到溶解后，把兩液調(diào)勻，補(bǔ)充水分，調(diào)整pH值到7.4，分裝，滅菌，備用。微藻培養(yǎng)基BG-11培養(yǎng)基NaNO3 1.5g，K2HPO4 ·3H2O0.04g，MgSO4·7H2O0.075g，CaCl2 ·2H2O0.036g Citric Acid （檸檬酸）0.006g，F(xiàn)erric ammonium citrate（檸檬酸鐵銨0.006g，EDTA (dinatrium-salt) 0.001g，Na2CO3 0.02g，A5 + Co solution * （A5溶液1000×）1ml Distilled Water （蒸餾水）919mlSE培養(yǎng)基NaNO30.25gK2HPO4 . 3H2O0.075gMgSO4 . 7H2O0.075gCaCl2 . 2H2O0.025gKH2PO40.175gNaCl0.025Soil extract40mlFeCl3·6H2O0.005Fe—EDTA1mlA5 solution 1000×1mldistilled water958mlSoil Extract（土壤提取液）配置方法取花園土未施過肥0.5kg置于燒杯或三角瓶中，加入蒸餾水1000毫升，瓶口用透氣塞封口，在水浴中沸水加熱2小時(shí)，冷卻數(shù)小時(shí)，在無菌條件下過濾，取上清液，將滅菌蒸餾水加入上清液至總體積1000毫升。土壤提取液保存在4℃?zhèn)溆?。Composition of the A5 solutionAdd to 100 ml of distilled water:（加入100ml 的蒸餾水）H3BO3286 mgMnCl2 . 4H2O181 mgZnSO4 . 7H2O22 mgCuSO4 . 5 H2O7.9 mg（NH4）6Mo7O24 .4H2O3.9 mgEDTA-Fe的配置方法：將EDTA和FeCl3·6H2O分別溶于水和HCl（0.1N），混勻即可。Na2EDTA1gdistilled water50mlFeCl3·6H2O81 mgHCl（0.1N）50mlPr培養(yǎng)基Preparation: to 997 mL of glass-distilled water, add 1.0 g proteose peptone, 15.0 g agar, and the following stock solutions:working solutiong/1000 mL H2ONaNO30.25CaCl2. 2H2O0.025MgSO4. 7H2O0.075K2HPO40.075KH2PO40.175NaCl0.025A5 solution1mlEDTA-Fe1mlFeCl3 (0.05%)1mlA5溶液和EDTA-Fe溶液配制方法同上。真菌培養(yǎng)基（1）薩市（Sabouraud’s）培養(yǎng)基蛋白胨10g，瓊脂20g，麥芽糖40g，水1000ml先把蛋白胨、瓊脂加水后，加熱，不斷攪拌，待瓊脂溶解后，加入40g麥芽糖（或葡萄糖），攪拌，使它溶解，然后分裝，滅菌，備用。本培養(yǎng)菌是培養(yǎng)許多種類真菌所常用的。（2）馬鈴薯糖瓊脂培養(yǎng)基把馬鈴薯洗凈去皮，取200g切成小塊，加水1000ml，煮沸半小時(shí)后，補(bǔ)足水分。在濾液中加入10g瓊脂，煮沸溶解后加糖20g（用于培養(yǎng)霉菌的加入蔗糖，用于培養(yǎng)酵母菌的加入葡萄糖），補(bǔ)足水分，分裝，滅菌，備用。把這培養(yǎng)基的pH值調(diào)到7.2-7.4，配方中的糖，如用葡萄糖還可用來培養(yǎng)放線菌和芽孢桿菌。（3）豆芽汁培養(yǎng)基黃豆芽100g，瓊脂15g，葡萄糖20g，水1000ml洗凈黃豆芽，加水煮沸30分鐘。用紗布過濾，濾液中加入瓊脂，加熱溶解后放入糖，攪拌使它溶解，補(bǔ)足水分到1000ml，分裝，滅菌，備用。把這培養(yǎng)基的pH值調(diào)到7.2-7.4，可用來培養(yǎng)細(xì)菌和放線菌。（4）豌豆瓊脂培養(yǎng)基豌豆80粒，瓊脂5g，水200ml瓊脂取80粒干豌豆加水，煮沸1小時(shí)，用紗布過濾后，在濾液中加入瓊脂，煮沸到溶解，分裝，滅菌，備用。食用菌菌種培養(yǎng)基（1）馬鈴薯-蔗糖-瓊脂培養(yǎng)基20%馬鈴薯煮汁1000ml，蔗糖20g，瓊脂18g把馬鈴薯洗凈去皮后，切成小塊。稱取馬鈴薯小塊200g，加水1000ml，煮沸20分鐘后，過濾。在濾汁中補(bǔ)足水分到1000ml，即成20%馬鈴薯煮汁。在馬鈴薯煮汁中加入瓊脂和蔗糖，煮沸，使它溶解后，補(bǔ)足水分，分裝，滅菌，備用。使用該培養(yǎng)基對(duì)pH值要求不嚴(yán)格，可以不測(cè)定。（2）綜合馬鈴薯培養(yǎng)基20%馬鈴薯煮汁1000ml，磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂1.5g，葡萄糖20g，維生素10mg，瓊脂18g先配制20%馬鈴薯煮汁，方法同上。在煮汁中加入上述各種組分，加熱溶解后補(bǔ)足水分，調(diào)整pH值到6。分裝，滅菌，備用。 該培養(yǎng)基用于培養(yǎng)和保存靈芝、平菇、香菇等食用菌菌種。煙草的培養(yǎng)基在植物組織培養(yǎng)時(shí)，通過調(diào)節(jié)IAA和CTK的比值能影響愈傷組織分化出根或芽。CTK/IAA高時(shí)，愈傷組織分化芽。CTK/IAA低時(shí)，分化根；CTK/IAA比例適中維持愈傷組織不分化。愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基制備以MS培養(yǎng)基母液為基礎(chǔ)，向潔凈鋁鍋中順序加入大量元素20×母液100mL，微量元素100×母液20mL，鐵鹽100×母液20mL，維生素100×母液20mL，肌醇200×母液10mL，甘氨酸200×母液10mL，配制得MS培養(yǎng)基后，再加入0.5mg·L-1的BA8mL，0.5mg·L-1的NAA8mL。然后加入實(shí)際配制培養(yǎng)基體積約2/3-3/4的蒸餾水，加入40g蔗糖后攪拌使其溶化，用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl調(diào)整pH值至5.8-6.0。加入14g瓊脂，將鋁鍋置于電爐上，攪拌加熱使瓊脂完全溶化，然后用蒸餾水定容至終體積2L，繼續(xù)加熱幾分鐘使之混合均勻后分裝于三角瓶中。煙草煙草葉片愈傷組織誘導(dǎo)取一無菌培養(yǎng)皿，用解剖刀切取1-2片無菌苗葉片置于無菌培養(yǎng)皿中，并用解剖刀將葉片切成2mm2左右的小片，然后將其接種于準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基上，每瓶接種5小片，一共接種6瓶。接種后的三角平置于24條件下黑暗培養(yǎng)1周，然后在同樣溫度下有光照和全黑暗下培養(yǎng)3周直至愈傷組織形成（兩種情況各置3瓶）。觀察愈傷組織誘導(dǎo)結(jié)果，統(tǒng)計(jì)愈傷組織誘導(dǎo)率。器官分化及植株再生培養(yǎng)將誘導(dǎo)的愈傷組織按類型分別轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基上,置于連續(xù)光照，溫度20-22℃條件下培養(yǎng)3周，統(tǒng)計(jì)愈傷組織再生植株情況。愈傷組織誘導(dǎo)的總體情況煙草愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)4周后，愈傷組織基本形成，即排除因生長(zhǎng)時(shí)間不夠而未形成愈傷的情況。具體情況見表一中所示。6瓶培養(yǎng)物均有愈傷形成，且都未發(fā)生污染，但誘導(dǎo)率幾乎各不相同。其中，在光照條件下培養(yǎng)的3瓶平均愈傷誘導(dǎo)率為60.0%，在黑暗條件下培養(yǎng)的3瓶平均愈傷誘導(dǎo)率為46.7%。由于實(shí)驗(yàn)過程中，外植體即煙草葉片取得偏小，接種時(shí)可能已有部分外植體的大部分細(xì)胞脫水死亡，使整個(gè)實(shí)驗(yàn)的愈傷組織誘導(dǎo)率偏低，愈傷塊偏小。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基RPMI1640培養(yǎng)基是一個(gè)全營(yíng)養(yǎng)型培養(yǎng)基，廣泛應(yīng)用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，如人骨髓瘤細(xì)胞、鼠雜交瘤細(xì)胞、人白細(xì)胞以及B細(xì)胞和T細(xì)胞。最初設(shè)計(jì)用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)和人白血病細(xì)胞的單層細(xì)胞培養(yǎng)。特殊培養(yǎng)基播報(bào)編輯選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基是指根據(jù)某種微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。其功能是使混合菌樣中的劣勢(shì)菌變成優(yōu)勢(shì)菌，從而提高該菌的篩選效率。酵母菌富集培養(yǎng)基葡萄糖5%，尿素0.1%，硫化銨0.1%，磷酸二氫鉀0.25%，磷酸氫二鈉0.05%，七水合硫酸鎂0.1%，七水合硫酸鐵0.01%，酵母膏0.05%，孟加拉紅0.003%，pH4.5Ashby無氮培養(yǎng)基富集好氧自生固氮菌甘露醇1%，磷酸二氫鉀0.02%，七水合硫酸鎂0.02%，氯化鈉0.02%，二水合硫酸鈣0.01%，碳酸鈣0.5%鑒別培養(yǎng)基播報(bào)編輯EMB培養(yǎng)基常用于鑒別E.coli蛋白胨10g，乳糖5g，蔗糖5g，磷酸氫二鉀2g，伊紅Y0.4g，美藍(lán)0.065g，蒸餾水1000g，pH7.22216E培養(yǎng)基配方分離海洋微生物的培養(yǎng)基配方蛋白胨5g，酵母膏1g，磷酸高鐵0.01g，瓊脂15-20g，陳海水1000ml，煮沸氫氧化鈉（5%）的溶液調(diào)pH值7.6-7.8伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基可用于檢測(cè)水中大腸桿菌的含量首先按以下組成配制基礎(chǔ)培養(yǎng)基。蛋白胨10g，NaCl5g瓊脂15-20g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容至1000mL，調(diào)節(jié)pH為7.6。滅菌后，冷卻至60℃左右，再按下面的比例，在無菌操作條件下加入滅菌的乳糖溶液、伊紅水溶液以及美藍(lán)水溶液。搖勻后，立即倒平板。溶液中的乳糖在高溫下會(huì)破壞，因此一般使用壓力為70kPa、溫度為115℃的條件滅菌20分鐘?；A(chǔ)培養(yǎng)基100mL，20%乳糖溶液2mL2%伊紅水溶液2mL，0.5%美藍(lán)水溶液1mL天然培養(yǎng)基播報(bào)編輯天然培養(yǎng)基是指來自動(dòng)物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基，如血漿、血清、淋巴液、雞胚浸出液等。組織培養(yǎng)技術(shù)建立早期，體外培養(yǎng)細(xì)胞都是利用天然培養(yǎng)基。但是由于天然培養(yǎng)基制作過程復(fù)雜、批間差異大，因此逐漸為合成培養(yǎng)基所替代。廣泛使用的天然培養(yǎng)基是血清，另外各種組織提取液、促進(jìn)細(xì)胞貼壁的膠原類物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也是必不可少。血清種類目用于組織培養(yǎng)的血清主要是牛血清，培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也用人血清、馬血清等。選擇用牛血清培養(yǎng)細(xì)胞的原因：來源充足、制備技術(shù)成熟、經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間的應(yīng)用考驗(yàn)人們對(duì)其有比較深入的理解。牛血清對(duì)絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞都是適合的，但并不排除在培養(yǎng)某種細(xì)胞時(shí)使用其他動(dòng)物血清更合適。牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份，具有極為重要的功能。牛血清分為小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛；新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛；小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然，胎牛血清是品質(zhì)最高的，因?yàn)樘ヅ＿€未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分最少。血清樣本血清的主要成分血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。血清主要作用1．提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無機(jī)物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等，是細(xì)胞生長(zhǎng)必須的物質(zhì)。2．提供激素和各種生長(zhǎng)因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素（氫化可的松、地塞米松）、類固醇激素（雌二醇、睪酮、孕酮）等。生長(zhǎng)因子如成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮生長(zhǎng)因子、血小板生長(zhǎng)因子等。3．提供結(jié)合蛋白：結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì)，如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細(xì)胞代謝過程中起重要作用。4．提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷。5．對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用：有一些細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓樣細(xì)胞可以釋放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的，則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因?yàn)橐鹊鞍酌敢呀?jīng)被廣泛用于貼壁細(xì)胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷，特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時(shí)，粘度起到重要作用。血清還含有一些微量元素和離子，他們?cè)诖x解毒中起重要作用，如SeO3、硒等。血清培養(yǎng)基主要問題1．血清的成份可能有幾百種之多，對(duì)其準(zhǔn)確的成份、含量及其作用機(jī)制不清楚，尤其是對(duì)其中一些多肽類生長(zhǎng)因子、激素和脂類等尚未充分認(rèn)識(shí)，這給研究工作帶來許多困難。2．血清都是批量生產(chǎn)，各批量之間差異很大，而且血清保存期至多一年，因此，要保證每批血清的相似性極為困難，從而使實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化和連續(xù)性受到限制。3．對(duì)大多數(shù)細(xì)胞，在體內(nèi)狀態(tài)，血清不是它們接觸的生理學(xué)液體，只是在損傷愈合以及血液凝固過程中才接觸血清，因此使用血清有可能改變某種細(xì)胞在體內(nèi)的正常狀態(tài)，血清可能促進(jìn)某些細(xì)胞的生長(zhǎng)（成纖維細(xì)胞）同時(shí)抑制另一類細(xì)胞生長(zhǎng)（表皮細(xì)胞）。4．血清含一些對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì)，如多胺氧化酶，能與來自高度繁殖細(xì)胞的多胺反應(yīng)（如精胺、亞精胺）形成有細(xì)胞毒性作用的聚精胺。補(bǔ)體、抗體、細(xì)菌毒素等都會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)，甚至造成細(xì)胞死亡。5．動(dòng)物個(gè)體不同，血清產(chǎn)地、批號(hào)不同，每批質(zhì)量差異甚大，其成分不能保持一致。6．取材中可能帶入支原體、病毒，對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生潛在影響，可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或?qū)嶒?yàn)結(jié)果不可靠性。7．大規(guī)模生產(chǎn)中，血清來源越來越困難，價(jià)格昂貴，是構(gòu)成動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)生產(chǎn)成本的主要部分之一。血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)血清質(zhì)量高低取決于兩方面因素：一是取材對(duì)象，二是取材過程。用于取材的動(dòng)物應(yīng)健康無病并且在指定的出生天數(shù)之內(nèi)，取材過程應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程執(zhí)行，制備出的血清要經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定。WHO公布的《用動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品規(guī)程》中的要求：1．牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國(guó)家。并應(yīng)具備適當(dāng)?shù)谋O(jiān)測(cè)系統(tǒng)。2．有些國(guó)家還要求牛血清來自未用過反芻動(dòng)物蛋白飼料的牛群。3．證明所用牛血清中不含對(duì)所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物。4．血清要通過濾膜過濾除菌，保證無菌。5．無細(xì)菌、霉菌、支原體和病毒的污染，有些國(guó)家要求無細(xì)菌噬菌體污染。6．對(duì)細(xì)胞有良好的支持繁殖作用。我國(guó)在對(duì)牛血清的質(zhì)量2000年版《中國(guó)生物制品主要原輔料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》中提出比較嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)要求。包括蛋白質(zhì)含量，細(xì)菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細(xì)菌內(nèi)毒素，支持細(xì)胞增殖檢查。培養(yǎng)基配制播報(bào)編輯一、配制用水培養(yǎng)基的大部分是水，所以水的質(zhì)量直接影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。按Waymouth標(biāo)準(zhǔn)，水的電阻應(yīng)為200萬歐姆，一般實(shí)驗(yàn)室里以玻璃蒸餾器制備的雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。二、培養(yǎng)基培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實(shí)驗(yàn)室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基，以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）調(diào)pH至7.2-7.4，若pH值超過7.6或遠(yuǎn)低于6.8，則大多數(shù)細(xì)胞不能生長(zhǎng)。RPMI-1640不耐高壓滅菌，使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過處理。三、血清培養(yǎng)中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高壓滅菌，無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補(bǔ)體，置4℃冰箱存放待用。配制時(shí)含量視培養(yǎng)細(xì)胞種類、時(shí)間而定，一般用10—15%。由于血清成分復(fù)雜、條件不易控制，可選用無血清培養(yǎng)基。四、抗菌素為防止培養(yǎng)時(shí)期細(xì)菌的污染，可在培養(yǎng)基中添加適當(dāng)抗菌素，一般用量與組織細(xì)胞培養(yǎng)相同：卡那霉素100單位/毫升，或雙抗--青霉素100單位/毫升，鏈霉素100微克/毫升。五、植物血凝素（PHA）非增殖期的細(xì)胞不能制備染色體，如人外周血淋巴細(xì)胞，但在離體培養(yǎng)過程中，在PHA的作用下，可被刺激轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞而進(jìn)入有絲分裂。經(jīng)實(shí)驗(yàn)測(cè)定其分裂高峰分別于培養(yǎng)后44-48小時(shí)和68-72小時(shí)。PHA有粘多糖，蛋白質(zhì)兩種重要成分。粘多糖促使有絲分裂，蛋白質(zhì)起凝集作用。PHA激活的細(xì)胞數(shù)隨其濃度而增加，直至全部免疫活性細(xì)胞均被激活為止，但PHA濃度過高會(huì)引起凝集，一般采用4%濃度為好。制備基本方法播報(bào)編輯培養(yǎng)基配方的選定同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會(huì)有某些差別。因此，除所用的是標(biāo)準(zhǔn)方法，應(yīng)嚴(yán)格按其規(guī)定進(jìn)行配制外，一般均應(yīng)盡量收集有關(guān)資料，加以比較核對(duì)，再依據(jù)自己的使用目的加以選用，記錄其來源。培養(yǎng)基的制備記錄每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄，包括培養(yǎng)基名稱，配方及其來源，和各種成份的牌號(hào)。最終pH值、消毒的溫度和時(shí)間制各的日期和制備者等，記錄應(yīng)復(fù)制一份，原記錄保存?zhèn)洳椋瑥?fù)制記錄隨制好的培養(yǎng)基一同存放、以防發(fā)生混亂。培養(yǎng)基成分的稱取培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯(cuò)亂，最好一次完成，不要中斷?？蓪⑴浞街糜诎鴤?cè)，每稱完一種成分即在配方上做出記號(hào)，并將所需稱取的藥品一次取齊，置于左側(cè)，每種稱取完畢后，即移放于右側(cè)。完全稱取完畢后，還應(yīng)進(jìn)行一次檢查。培養(yǎng)基各成份的混合和溶化培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋，以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中，使細(xì)菌不易生長(zhǎng)。最好使用不銹鋼鍋加熱溶化，也可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動(dòng)蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時(shí)、可先用溫水加熱并隨時(shí)擾動(dòng)，以防焦化、如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使用，應(yīng)重新制備。待大部分固體成分溶化后，再用較小火力使所有成分完全溶化。迄至煮沸。如為瓊脂培養(yǎng)基，應(yīng)先用一部分水將瓊脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過程中，因蒸發(fā)而丟失的水分，最后必須加以補(bǔ)足。培養(yǎng)基pH的初步調(diào)整培養(yǎng)基各成分完全溶解后，應(yīng)進(jìn)行pH的初步調(diào)正，因培養(yǎng)基在加熱消毒過程中、pH會(huì)有所變化，例如，牛肉浸液約可降低pH0.2。而腸浸液pH卻會(huì)有顯著的升高。因此，對(duì)這個(gè)步驟，操作者應(yīng)隨時(shí)注意探索經(jīng)驗(yàn)、以期能掌握培養(yǎng)基的最終pH，保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。pH調(diào)正后，還應(yīng)將培養(yǎng)基煮沸數(shù)分鐘，以利培養(yǎng)基沉淀物的析出。注意事項(xiàng)播報(bào)編輯培養(yǎng)基在使用前通過高壓或過濾滅菌。防止污染應(yīng)該注意以下事項(xiàng)：確認(rèn)工作細(xì)胞庫是否被污染，確認(rèn)毒種工作種子批是否被污染，確認(rèn)所用培養(yǎng)基及其添加成分（如小牛血清、NaHCO3等）是否被污染，均可用細(xì)菌、真菌及支原體無菌試驗(yàn)來確認(rèn)并排除。同時(shí)要對(duì)無菌試驗(yàn)培養(yǎng)基的靈敏度進(jìn)行驗(yàn)證。實(shí)際生產(chǎn)中，可以從配制好的培養(yǎng)液中取少量加入營(yíng)養(yǎng)瓊脂于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，48小時(shí)即可觀察有無污染。其它：高壓滅菌設(shè)備、過濾除菌設(shè)備均應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證，確保滅菌和除菌效果；前者應(yīng)在投產(chǎn)前及其后的每6個(gè)月進(jìn)行驗(yàn)證，后者應(yīng)在每次除菌前、后進(jìn)行驗(yàn)證工作（至少應(yīng)在除菌后進(jìn)行一次）。另外，應(yīng)將有毒區(qū)與無毒區(qū)嚴(yán)格分開，并有各自獨(dú)立的空氣凈化系統(tǒng)及孵室，有毒區(qū)對(duì)無毒區(qū)應(yīng)保持相對(duì)負(fù)壓，防止病毒對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞（尤其是細(xì)胞庫）的污染。 [3]新手上路成長(zhǎng)任務(wù)編輯入門編輯規(guī)則本人編輯我有疑問內(nèi)容質(zhì)疑在線客服官方貼吧意見反饋投訴建議舉報(bào)不良信息未通過詞條申訴投訴侵權(quán)信息封禁查詢與解封?2024?Baidu?使用百度前必讀?|?百科協(xié)議?|?隱私政策?|?百度百科合作平臺(tái)?|?京ICP證030173號(hào)?京公網(wǎng)安備110000020000細(xì)胞培養(yǎng)基類型及特點(diǎn)（細(xì)胞培養(yǎng)第一更） - 知乎
細(xì)胞培養(yǎng)基類型及特點(diǎn)（細(xì)胞培養(yǎng)第一更） - 知乎首發(fā)于那些值得一直學(xué)習(xí)的點(diǎn)滴切換模式寫文章登錄/注冊(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基類型及特點(diǎn)（細(xì)胞培養(yǎng)第一更）瞬間de回眸基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)在讀研究僧培養(yǎng)基種類經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種，其中 DMEM、 RPMI 1640、 MEM 、 DMEM/F12 都是應(yīng)用最廣泛的培養(yǎng)基。其他 如 M199 、 IMDM 、 L15培養(yǎng)基等也用于某些細(xì)胞的培養(yǎng)。其具體的特征及應(yīng)用如下：1、BME細(xì)胞培養(yǎng)基基礎(chǔ) Eagle 培養(yǎng)基 (BME) 是一種廣泛使用的合成基礎(chǔ)培養(yǎng)基，可支持很多種類的哺乳動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)。BME 最初1955年由 Harry Eagle 針對(duì) HeLa 細(xì)胞和小鼠成纖維細(xì)胞開發(fā)，其發(fā)現(xiàn)了體外細(xì)胞生長(zhǎng)的最低要求。此后 BME 已用于其他人細(xì)胞系，包括 WI-38 和 MRC-5。BME 含有八種 B 族維生素、十種必需氨基酸以及胱氨酸、酪氨酸和谷氨酰胺以及酚紅，不含有L-谷氨酰胺和HEPES。BME 不含蛋白、脂質(zhì)或生長(zhǎng)因子。因此，BME 需要補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)成分，通常需要添加 10% 胎牛血清 (FBS)。BME 使用碳酸氫鈉緩沖系統(tǒng) (2.2 g/L)，因此需要 5-10% CO2 環(huán)境來維持生理 pH 值。在此基礎(chǔ)上改良的細(xì)胞培養(yǎng)基品種有MEM、DMEM、IMDM等。2、MEM細(xì)胞培養(yǎng)基MEM (Minimum Essential Medium) 又稱低限量Eagle培養(yǎng)基，1959年在Eagle's基礎(chǔ)培養(yǎng)基（BME）上修改而來，刪去賴氨酸、生物素，是一種較為常用的細(xì)胞培養(yǎng)基。MEM 可用于各種懸浮和貼壁的哺乳動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)，包括 HeLa、BHK-21、293、HEP-2、HT-1080、MCF-7、成纖維細(xì)胞和原代大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞等。 Harry Eagle此后對(duì) MEM 進(jìn)行了許多其他改良，包括 Glasgow’s MEM、MEM α、DMEM 以及 Temin’s 改良培養(yǎng)基。MEM 含有 Earle’s 平衡鹽用于 CO2 培養(yǎng)箱，或含有 Hanks' 平衡鹽用于無 CO2 培養(yǎng)箱。3、DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium)是由Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基，是一種廣泛使用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，可用于支持很多種類的哺乳動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)。已經(jīng)在 DMEM 中成功培養(yǎng)出的細(xì)胞包括原代成纖維細(xì)胞、神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞、HUVEC、平滑肌細(xì)胞，以及 HeLa、293、Cos-7 和 PC-12 等細(xì)胞系。DMEM 與其他培養(yǎng)基的不同之處在于其含有相當(dāng)于初始 Eagle 最低必需培養(yǎng)基 4 倍濃度的氨基酸和維生素。采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用。DMEM 最初采用低濃度葡萄糖 (1 g/L) 和丙酮酸鈉配制，但通常在含/不含丙酮酸鈉的高糖環(huán)境下使用。后來將葡萄糖含量調(diào)整至(4.5g/L)，就是我們用的高糖DMEM。低糖適于依賴性貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，特別適用于生長(zhǎng)速度快、附著性較差的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)。高糖更適合高密度懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，也適用于附著性較差，但又不希望它脫離原來生長(zhǎng)點(diǎn)的克隆培養(yǎng)，也可用于雜交瘤中骨髓瘤細(xì)胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞的培養(yǎng)。例如CHO細(xì)胞表達(dá)生產(chǎn)乙肝疫苗、CHO細(xì)胞表達(dá)EPO。4、IMDM細(xì)胞培養(yǎng)基IMDM（Iscove's Modified Dulbecco's Medium，Iscove 改良杜氏培養(yǎng)基）非常適用于快速增殖的高密度細(xì)胞培養(yǎng)，包括 Jurkat、COS-7 和巨噬細(xì)胞。Guilber 和Iscove將Dulbecco' Medium 改良為 Iscove's Medium，用于培養(yǎng)紅細(xì)胞和巨噬細(xì)胞前體。此種培養(yǎng)基包含硒和其他氨基酸及維生素。此外，這款獨(dú)特的培養(yǎng)基不含鐵，使用硝酸鉀取代硝酸鐵。IMDM還能夠促進(jìn)小鼠B淋巴細(xì)胞，LPS刺激的B細(xì)胞，骨髓造血細(xì)胞，T細(xì)胞和淋巴瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。5、RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基RPMI 1640 培養(yǎng)基 (Roswell Park Memorial Institute 1640 Medium) 起初是1967年Moore等人研制，為了懸浮培養(yǎng)人白血病單層細(xì)胞而開發(fā)的。此后，RPMI 1640 培養(yǎng)基被發(fā)現(xiàn)適用于多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞，包括 HeLa 細(xì)胞、Jurkat 細(xì)胞、MCF-7 細(xì)胞、PC12 細(xì)胞、PBMC 細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞和癌細(xì)胞。RPMI 1640 培養(yǎng)基相比其他培養(yǎng)基之所以具有獨(dú)特的效果，是因?yàn)槠渲泻羞€原劑谷胱甘肽和高濃度的維生素。RPMI 1640 培養(yǎng)基含有生物素、維生素 B12 以及 PABA，這些成分是 Eagle's MEM 和 DMEM 所不具備的。此外，該培養(yǎng)基之中還含有高濃度的維生素肌醇和膽堿。RPMI-1640包含 GlutaMAX、酚紅；不包含 HEPES。6、HamF10細(xì)胞培養(yǎng)基1963年Ham設(shè)計(jì)，含微量元素，可在血清含量低時(shí)用，適用于克隆化培養(yǎng)。Ham's F-10 營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基可用于無血清生長(zhǎng)的中國(guó)倉鼠卵巢（CHO）細(xì)胞和需添加血清的多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞系的生長(zhǎng)。7、DMEM/F12細(xì)胞培養(yǎng)基Ham's F-12 營(yíng)養(yǎng)混合物 (F-12) 設(shè)計(jì)用于中國(guó)倉鼠卵巢 (CHO) 細(xì)胞的無血清單細(xì)胞鋪板。自此之后，F(xiàn)-12 已用于 CHO 培養(yǎng)物的無血清生長(zhǎng)以及其他哺乳動(dòng)物細(xì)胞的添加血清生長(zhǎng)，包括軟骨細(xì)胞和大鼠前列腺上皮細(xì)胞。與其他基礎(chǔ)培養(yǎng)基相比，F(xiàn)-12 含有更廣泛的成分，包括鋅、腐胺、次黃嘌呤和胸苷。F-12 不含蛋白質(zhì)或生長(zhǎng)因子。DMEM/F-12 是一種 1:1 DMEM 和 Ham's F-12 混合物。該配方將 DMEM 的高濃度葡萄糖、氨基酸及維生素與 F-12 的廣泛組分結(jié)合在一起。DMEM/F-12 (Dulbecco's Modified Eagle Medium/Nutrient Mixture F-12) 是一種廣泛使用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，可用于支持很多種類的哺乳動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)。已在 DMEM/F-12 中成功培養(yǎng)的細(xì)胞包括 MDCK、膠質(zhì)細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、人內(nèi)皮細(xì)胞及小鼠成纖維細(xì)胞。8、M199細(xì)胞培養(yǎng)基1950年Morgan等設(shè)計(jì)的具有確定化學(xué)成分的細(xì)胞培養(yǎng)液，即M-199。199 培養(yǎng)基起初開發(fā)用于雞胚成纖維細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)研究。它具有廣泛的物種適用性，特別適用于非轉(zhuǎn)化細(xì)胞的培養(yǎng)。199 培養(yǎng)基廣泛用于病毒學(xué)、疫苗生產(chǎn)以及小鼠胰腺上皮和大鼠晶狀體組織原代外植體的體外培養(yǎng)。與其他基礎(chǔ)培養(yǎng)基相比，199 培養(yǎng)基含有獨(dú)特的成分，包括腺嘌呤、腺苷、次黃嘌呤、胸腺嘧啶和其他維生素。9、McCoy5A培養(yǎng)基1959年MeCoy為肉瘤細(xì)胞設(shè)計(jì)，BSS＋40種成分?？芍С侄喾N（如骨髓、皮膚、肺和脾臟等）的原代移植物的生長(zhǎng)，除適于一般的原代細(xì)胞培養(yǎng)外，主要用于作組織活檢培養(yǎng)、一些淋巴細(xì)胞培養(yǎng)以及一些難培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)支持。例如Jensen大鼠肉瘤成纖維細(xì)胞、人淋巴細(xì)胞、HT-29、BHL-100等上皮細(xì)胞。10、L15 細(xì)胞培養(yǎng)基Leibovitz L-15 培養(yǎng)基支持 HEP-2 猴腎臟細(xì)胞以及胚胎和成人組織的原代組織塊生長(zhǎng)。L-15 采用磷酸鹽和游離氨基酸而非碳酸氫鈉進(jìn)行緩沖。L-15培養(yǎng)液適用于快速增殖瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，用于在CO2缺乏的情況下培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞株。此培養(yǎng)液采用磷酸鹽緩沖體系，氨基酸組成進(jìn)一步改良，并由半乳糖替代了葡萄糖。培養(yǎng)基成分細(xì)胞培養(yǎng)基的種類很多，按其來源分為合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基（目前使用的培養(yǎng)基絕大部分是合成培養(yǎng)基），按其物質(zhì)狀態(tài)分為干粉培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基兩類。干粉培養(yǎng)基需由實(shí)驗(yàn)者自己配制并滅菌，液體培養(yǎng)基由專業(yè)商家提供，用戶可直接使用，非常方便。1、合成培養(yǎng)基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、無機(jī)鹽、維生素及其它輔助物質(zhì)：氨基酸氨基酸是組成蛋白質(zhì)的基本單位。不同種類的細(xì)胞對(duì)氨基酸的要求各異，但有幾種氨基酸細(xì)胞自身不能合成，必須依靠培養(yǎng)液提供，這幾種氨基酸稱為必需氨基酸。其中谷氨酰胺是細(xì)胞合成核酸和蛋白質(zhì)必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)不良而死亡。因此，各種培養(yǎng)液中都有較大量的谷氨酰胺。但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培養(yǎng)液內(nèi)。已含谷氨酰胺的培養(yǎng)液在4℃冰箱中儲(chǔ)存2 周以上時(shí)，還應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺。碳水化合物碳水化合物是細(xì)胞生長(zhǎng)主要能量來源，其中有的是合成蛋白質(zhì)和核酸的成分。主要有葡萄糖、核糖、脫氧核糖、丙酮酸鈉和醋酸等。無機(jī)鹽培養(yǎng)液中無機(jī)鹽的主要功能是幫助細(xì)胞維持滲透壓平衡。此外，通過提供鈉，鉀和鈣離子，幫助細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞膜功能。培養(yǎng)液的滲透壓是一個(gè)非常重要的因素, 細(xì)胞通常可耐受260mOsm/kg ～320 mOsm/kg。標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液的滲透壓在此范圍內(nèi)波動(dòng)。特別注意：向培養(yǎng)液中加入其它物質(zhì)有可能會(huì)明顯改變培養(yǎng)液的滲透壓，特別是溶于強(qiáng)酸或強(qiáng)堿中的物質(zhì)。向培養(yǎng)液中添加HEPES 時(shí)需按以下方法調(diào)節(jié)鈉離子濃度。緩沖系統(tǒng)大多數(shù)細(xì)胞所需pH 在 7.2 - 7.4。但是，細(xì)胞培養(yǎng)最適pH 值隨培養(yǎng)的細(xì)胞種類不同而不同。成纖維細(xì)胞喜歡較高pH (7.4 - 7.7), 而傳代轉(zhuǎn)化細(xì)胞系則需要偏酸pH (7.0 - 7.4)。由于多數(shù)培養(yǎng)液靠碳酸氫鈉（NaHCO3）與CO2 體系進(jìn)行緩沖，因此，氣相中的CO2 濃度應(yīng)與培養(yǎng)液中碳酸氫鈉濃度相平衡。如果氣相或培養(yǎng)箱空氣中CO2 濃度設(shè)定在5％，培養(yǎng)液中NaHCO3 的加入量為1.97g/L；如果CO2 濃度維持在10％，培養(yǎng)液中NaHCO3 的加入量為3.95g/L。細(xì)胞培養(yǎng)瓶蓋不應(yīng)擰得太緊，以保證氣體交換。HEPES 是一種非離子緩沖液，在pH 7.2 - 7.4 范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力，但是非常昂貴，在高濃度時(shí)對(duì)一些細(xì)胞可能有毒。HEPES 緩沖液可與低水平的碳酸鈉（0.34g/L）共用，以抵消因額外加入HEPES 引起的滲透壓增加。在這種培養(yǎng)條件下，細(xì)胞培養(yǎng)瓶的蓋子應(yīng)擰緊，以防止培養(yǎng)液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中。大多數(shù)培養(yǎng)液中含有酚紅作為pH 指示劑，酸性培養(yǎng)液呈橙黃色，堿性培養(yǎng)液呈深紅色。維生素在細(xì)胞培養(yǎng)中，盡管血清是維生素重要來源， 但是許多培養(yǎng)基中添加了各種維生素以適合更多的細(xì)胞系生長(zhǎng)。其它成分在一些較為復(fù)雜的培養(yǎng)液中還包括其它一些成分。如在雜交瘤技術(shù)中常用的DMEM 培養(yǎng)液，使用時(shí)還需要補(bǔ)加丙酮酸鈉和2-巰基乙醇（2-Mercaptoethanol，2-Me）。2-Me 對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有很重要的作用。有人認(rèn)為它相當(dāng)于胎牛血清，有直接刺激細(xì)胞增殖作用。2-Me的活性部分是硫氫基，其中一個(gè)重要作用是使血清中含硫的化合物還原成谷胱甘肽，能誘導(dǎo)細(xì)胞的增殖，為非特異性的激活作用。同時(shí)避免過氧化物對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的損害。另一個(gè)重要作用是促進(jìn)分裂原的反應(yīng)和DNA 合成，增加植物凝集素(PHA)對(duì)淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化作用，已廣泛應(yīng)用于雜交瘤技術(shù)，另外，也開始用于一些難以培養(yǎng)的細(xì)胞。2-Me 是一種小分子還原劑，極易氧化。分子量為78.13，純的2-Me 是一種無色有刺激味的液體，比重為1.110-1.120(Do20)，常用終濃度為5×10-5M。常配制成0.1M 的儲(chǔ)存液，用時(shí)每升培養(yǎng)液加0.5ml。液體培養(yǎng)基保存：液體培養(yǎng)基應(yīng)于4℃冰箱避光保存，實(shí)驗(yàn)前放入37℃預(yù)熱。未加血清液體培養(yǎng)基有效期為12 個(gè)月。液體培養(yǎng)基中的L-谷氨酰胺會(huì)隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)而慢慢分解。如果細(xì)胞生長(zhǎng)不良，可以再添加適量L-谷氨酰胺。發(fā)布于 2022-10-23 16:11細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)生物實(shí)驗(yàn)?贊同 32??2 條評(píng)論?分享?喜歡?收藏?申請(qǐng)轉(zhuǎn)載?文章被以下專欄收錄那些值得一直學(xué)習(xí)的點(diǎn)滴這是一些適合學(xué)生學(xué)習(xí)，讀研等的一些亂七八糟的
全面解讀細(xì)胞培養(yǎng)基！ - 知乎
全面解讀細(xì)胞培養(yǎng)基！ - 知乎首發(fā)于細(xì)胞培養(yǎng)俱樂部切換模式寫文章登錄/注冊(cè)全面解讀細(xì)胞培養(yǎng)基！CellMax專注于細(xì)胞培養(yǎng)，歡迎大家來交流！1. 細(xì)胞培養(yǎng)基的種類按照細(xì)胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史，細(xì)胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細(xì)胞培養(yǎng)基、合成細(xì)胞培養(yǎng)基、無血清細(xì)胞培養(yǎng)基、限定化學(xué)成分細(xì)胞培養(yǎng)基等幾大種類。1.1 平衡鹽溶液（balanced salt solution，BSS）BSS主要是由無機(jī)鹽、葡萄糖組成，它的作用是維持細(xì)胞滲透壓平衡，保持pH穩(wěn)定及提供簡(jiǎn)單的營(yíng)養(yǎng)。其主要用于細(xì)胞的漂洗、配制其他試劑等。幾種常用的BSS配方如下（表1-1）。D-Hank's與Hank's的一個(gè)主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+，因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因?yàn)镃a2+、Mg2+是細(xì)胞膜的重要組成成份，參與細(xì)胞粘附等功能，使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免細(xì)胞結(jié)團(tuán)。此外，Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液，前者緩沖能力較弱，適合于密閉培養(yǎng)；后者緩沖能力較強(qiáng)，適合于5% CO2的培養(yǎng)條件。表1-1 幾種常用的BSS配方（g/L） 1.2 天然細(xì)胞培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基指來自動(dòng)物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基，如血漿、血清、淋巴液、雞胚浸出液等。其優(yōu)點(diǎn)是營(yíng)養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果良好，但缺點(diǎn)是成分復(fù)雜，來源受限且制作過程復(fù)雜、批間差異大。目前廣泛使用的天然培養(yǎng)基是血清，另外各種組織提取液、促進(jìn)細(xì)胞貼壁的膠原類物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也是必不可少。水解乳蛋白是乳白蛋白經(jīng)蛋白酶和肽酶水解的產(chǎn)物，含豐富的多肽、氨基酸和碳水化合物。一般配制成0.5 %溶液（采用平衡鹽溶液溶解）與合成培養(yǎng)基（如MEM細(xì)胞培養(yǎng)基）以1:1的比例混合使用。目前用于細(xì)胞培養(yǎng)的血清主要是牛血清，培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也用人血清、馬血清等。牛血清對(duì)絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞都是適合的，但并不排除在培養(yǎng)某種細(xì)胞時(shí)使用其他動(dòng)物血清更合適。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。此外，血清含一些對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì)，如多胺氧化酶，能與來自高度繁殖細(xì)胞的多胺反應(yīng)（如精胺、亞精胺）形成有細(xì)胞毒性作用的聚精胺。補(bǔ)體、抗體、細(xì)菌毒素等都會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)，甚至造成細(xì)胞死亡。目前，血清多作為一種添加成分與合成培養(yǎng)基混合使用，使用濃度一般為5 ~ 20 %，最常用是10 %。由于水解乳蛋白和血清成份復(fù)雜，批間差異大及存在病毒等外源污染風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)下游生物制品的分離純化和安全性都存在較大的影響，在生物制藥行業(yè)的使用也越來越少。因此，基于對(duì)血漿成份的分析，合成細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)運(yùn)而生。1.3 合成細(xì)胞培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分，用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計(jì)、配制的培養(yǎng)基。最早開發(fā)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基（minimal essential medium, MEM），其本質(zhì)為含有鹽、氨基酸、維生素和其他必需營(yíng)養(yǎng)物的pH緩沖的等滲混合物。在此基礎(chǔ)上，DMEM、IMDM 、HAM F12、PRMI1640等各種合成細(xì)胞培養(yǎng)基被不斷開發(fā)出來。常用合成培養(yǎng)基的配方此處不詳細(xì)介紹，其特性及應(yīng)用的范圍見表1-2。 表1-2 常用合成培養(yǎng)基的特性及應(yīng)用的范圍與天然培養(yǎng)基相比，有些天然的未知成分尚無法用已知的化學(xué)成分所替代，因此，細(xì)胞培養(yǎng)中使用合成培養(yǎng)基時(shí)必須加入一定量的天然培養(yǎng)基成分，以克服合成培養(yǎng)基的不足。最普遍的做法是添加5 ~ 10 %的血清，這樣才能維持細(xì)胞活力，促進(jìn)細(xì)胞增殖。針對(duì)不同的動(dòng)物細(xì)胞，現(xiàn)已開發(fā)了多種商業(yè)化、個(gè)性化的低血清細(xì)胞培養(yǎng)基配方，營(yíng)養(yǎng)成份更加豐富，血清使用量可降低至1～3 %，由此可減少了血清等動(dòng)物來源成份對(duì)生物制品安全性的影響。1.4 無血清細(xì)胞培養(yǎng)基（serum free medium，SFM）經(jīng)歷了天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基后，無血清培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)成為當(dāng)今細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一大趨勢(shì)。采用無血清培養(yǎng)可降低生產(chǎn)成本，簡(jiǎn)化分離純化步驟，避免病毒污染造成的危害。無血清培養(yǎng)基，一般是在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，加入成份完全明確的或部分明確的血清替代成份，達(dá)到既能滿足動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的要求，又能有效克服使用血清所帶來問題的目的。無血清培養(yǎng)基中通常需要添加一些額外的組分，才能幫助細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，包括以下幾大類物質(zhì)：1）促貼壁物質(zhì)：一般為細(xì)胞外基質(zhì)，如纖連蛋白、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細(xì)胞功能的分化因子，對(duì)許多細(xì)胞的繁殖和分化，起著重要作用。纖連蛋白主要促進(jìn)來自中胚層細(xì)胞的貼壁與分化，這些細(xì)胞包括成纖維細(xì)胞、肉瘤細(xì)胞、粒細(xì)胞、腎上皮細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞、CHO細(xì)胞、成肌細(xì)胞等。2）促生長(zhǎng)因子及激素：針對(duì)不同細(xì)胞添加不同的生長(zhǎng)因子。激素也是刺激細(xì)胞生長(zhǎng)、維持細(xì)胞功能的重要物質(zhì)，有些激素是許多細(xì)胞必不可少的，如胰島素。3）酶抑制劑：培養(yǎng)貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞，需要用胰酶消化傳代，在無血清培養(yǎng)基中需含酶抑制劑，以終止酶的消化作用，達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的。最常用的是大豆胰酶抑制劑。4）結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白：常見如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加量比較大，可增加培養(yǎng)基的粘度，保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷。許多旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基都含有牛血清白蛋白。5）微量元素：硒是最常見的。1.5 無蛋白無血清細(xì)胞培養(yǎng)基與化學(xué)組份限定無血清細(xì)胞培養(yǎng)基1）無蛋白無血清細(xì)胞培養(yǎng)基（protein free midium, PFM）這類培養(yǎng)基完全不含有動(dòng)物來源蛋白，但仍有部份添加物是植物蛋白的小水解片段或合成多肽片段，以及類固醇激素和脂類前體等，以替代動(dòng)物激素、生長(zhǎng)因子的作用。其特點(diǎn)是完全沒有蛋白或蛋白含量極低，有利于生物制品的分離純化。2）化學(xué)組份限定無血清細(xì)胞培養(yǎng)基（Chemically defined media, CDM）此類培養(yǎng)基是目前最安全、最為理想的無血清細(xì)胞培養(yǎng)基，所有成份的濃度都完全明確，即使其所添加的少量蛋白，也是可經(jīng)過純化處理，成份明確、濃度確定的蛋白。這類培養(yǎng)基較為理想地減少了生產(chǎn)的可變性，提高了生產(chǎn)工藝的重復(fù)性，并有效降低了純化成本。1.6 個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基嚴(yán)格意義上來說，個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基不在細(xì)胞培養(yǎng)基的傳統(tǒng)分類之列，其具體是指一類根據(jù)細(xì)胞特性、細(xì)胞培養(yǎng)工藝特點(diǎn)、使用者需求習(xí)慣而量身定制的細(xì)胞培養(yǎng)基，主要目的是提高細(xì)胞產(chǎn)率、產(chǎn)品質(zhì)量、產(chǎn)品安全性和降低血清的使用等。個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基可能是無血清培養(yǎng)基，也可能是低血清培養(yǎng)基，最終是為滿足某一種或某一類生物制品的生產(chǎn)需求。2. 培養(yǎng)基的基本組分細(xì)胞培養(yǎng)基必須含有充分的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，才能滿足新細(xì)胞合成、細(xì)胞代謝等生化反應(yīng)所需要的物質(zhì)和能量。細(xì)胞培養(yǎng)基的主要成份是水、氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)鹽和其它一些輔助營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等。此外，還可能含有血清、血清替代成分、pH指示劑等。2.1 水水是細(xì)胞的主要成份，也是細(xì)胞賴以生存的主要環(huán)境。細(xì)胞培養(yǎng)液中90 %以上的成份是水。細(xì)胞對(duì)水的品質(zhì)非常敏感，水的品質(zhì)將直接影響細(xì)胞培養(yǎng)的效果。而水中通常含有重金屬、氯、磷、有機(jī)物、熱原等污染物，細(xì)胞培養(yǎng)用水須經(jīng)過純化，品質(zhì)應(yīng)符合中國(guó)藥典注射用水標(biāo)準(zhǔn)或者超純水的標(biāo)準(zhǔn)。2.2 能源和碳源能源和碳源是用于維持細(xì)胞生命和支持細(xì)胞生長(zhǎng)，主要包括糖、糖酵解的產(chǎn)物和谷氨酰胺，其他氨基酸是次要的能源和碳源物質(zhì)。細(xì)胞能夠利用的糖類主要是六碳糖，目前大多體外培養(yǎng)時(shí)選取葡萄糖作為細(xì)胞的主要碳源和能量來源，因此細(xì)胞培養(yǎng)基中基本都含有葡萄糖，含量一般為5～25 mmol/L。在葡萄糖濃度較高時(shí)，細(xì)胞主要通過擴(kuò)散作用吸收葡萄糖，細(xì)胞膜內(nèi)外的葡萄糖濃度梯度是細(xì)胞吸收葡萄糖的動(dòng)力；在葡萄糖濃度較低時(shí)，主要由鈉離子推動(dòng)的高親和性轉(zhuǎn)運(yùn)過程使細(xì)胞攝取葡萄糖。葡萄糖進(jìn)入細(xì)胞后參與糖酵解、核酸代謝、糖原合成、能量代謝以及一些氨基酸的合成。與體內(nèi)的能量供應(yīng)途徑不同，體外培養(yǎng)時(shí)，一定的濃度范圍條件下，葡萄糖主要經(jīng)糖酵解循環(huán)轉(zhuǎn)化成乳酸來為細(xì)胞提供能量。2.3 氮源（氨基酸）氨基酸在細(xì)胞內(nèi)的重要生理作用主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：① 是蛋白質(zhì)的基本組成單位，用于合成蛋白質(zhì)和多肽；② 可用于合成某些具有重要生理作用的含氮化合物，如核酸、尼克酰胺等；③ 某些氨基酸還具有獨(dú)特的生理作用，如甘氨酸參與生物轉(zhuǎn)化作用，丙氨酸和谷氨酰胺參與細(xì)胞內(nèi)氨的運(yùn)輸?shù)?；?可轉(zhuǎn)變成糖類和脂肪，參與氧化供能。細(xì)胞所能利用的氨基酸是L型同分異構(gòu)體，D型氨基酸不能被利用。不同的細(xì)胞對(duì)氨基酸的需求各異，但有些必需氨基酸是細(xì)胞不能自身合成的，必須依靠外源的細(xì)胞培養(yǎng)液提供。其余非必需氨基酸，細(xì)胞可以自己合成，或通過轉(zhuǎn)氨作用由其他物質(zhì)轉(zhuǎn)化而來，但是在細(xì)胞培養(yǎng)基中添加適當(dāng)濃度的非必需氨基酸可以減輕細(xì)胞在合成方面的負(fù)擔(dān)，提高谷氨酰胺及其它必需氨基酸的利用率。絕大部分細(xì)胞對(duì)谷氨酰胺有較高的要求，可能因其不僅是細(xì)胞的主要氮源，且可作為細(xì)胞生長(zhǎng)的能源物質(zhì)和嘌呤、嘧啶核苷酸的前體，另外還可直接作為細(xì)胞增殖和產(chǎn)物合成中的蛋白質(zhì)和多肽的組成成分。在缺少谷氨酰胺時(shí)，細(xì)胞會(huì)生長(zhǎng)不良，甚至死亡。由于谷氨酰胺具有多種生理作用，體外動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)需要大量谷氨酰胺，利用量常超過其他必須氨基酸利用量的總和。2.4 維生素維生素是維持細(xì)胞生長(zhǎng)的生物活性物質(zhì)，在細(xì)胞代謝中起調(diào)節(jié)及控制作用。維生素可分為水溶性和脂溶性兩類，水溶性維生素主要包括泛酸、維生素B12、葉酸、煙酰胺、吡哆醛、硫胺素、核黃素、維生素C、膽堿、肌醇等；脂溶性維生素主要包括維生素A、D、 E、K等；有的培養(yǎng)液中還直接采用ATP和輔酶A；大部分培養(yǎng)基中還有生物素。許多維生素參與構(gòu)成各種酶的活性基團(tuán)的成分，沒有它們，酶便沒有活性，代謝活動(dòng)將無法進(jìn)行。比如，泛酸可以在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)變成?；d體蛋白和輔酶（如輔酶A），參與糖類、脂類和蛋白質(zhì)代謝中的催化反應(yīng)；維生素B12則在細(xì)胞內(nèi)參與葉酸的合成和脂肪酸的合成等。不同配方的細(xì)胞培養(yǎng)基中維生素的濃度有較大差異。例如，DMEM培養(yǎng)基中維生素的含量約為MEM培養(yǎng)基的兩倍，其原因是一方面不同種類維生素的作用不同，另一方面不同種類的細(xì)胞對(duì)維生素的需求也可能有較大差異，相應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)基的配方中維生素的含量也可能不同。2.5 無機(jī)鹽無機(jī)鹽是細(xì)胞維持生命活動(dòng)所不可缺少的營(yíng)養(yǎng)成分，主要有Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Cl－、PO43—、SO42—、HCO3－等，主要作用為維持細(xì)胞培養(yǎng)液滲透壓平衡，參與細(xì)胞的代謝活動(dòng)。此外，通過提供鈉，K+和Ca2+，幫助細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞膜功能。Na+是細(xì)胞外液中最主要的陽離子，對(duì)維持滲透壓的恒定有決定性的作用，還與Cl－共同參與生物電活動(dòng)、維持水平衡和酸堿平衡等。K+主要分布在細(xì)胞內(nèi)液，對(duì)于激活某些酶是必需的，并在調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的酸堿平衡上也有極重要意義。Ca2+和Mg2+主要參與信號(hào)傳導(dǎo)、能量代謝、脂肪酸合成、核糖體穩(wěn)定和蛋白質(zhì)合成等多種生理作用。PO43－、SO42－、HCO3－是基質(zhì)所需陰離子，同時(shí)是細(xì)胞內(nèi)電荷的調(diào)節(jié)者。磷對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)、代謝和調(diào)控都有重要的作用，含磷的化合物如核酸、磷脂、蛋白質(zhì)是構(gòu)成細(xì)胞的主要成分，ATP、ADP是能量生成、存儲(chǔ)和利用的不可或缺的化合物。上述離子對(duì)于細(xì)胞的作用各有不同，它們共同構(gòu)成了細(xì)胞賴以生存的滲透壓、pH和電化學(xué)平衡的微環(huán)境，細(xì)胞對(duì)于某種元素的吸收利用會(huì)受到其它元素的干擾，例如培養(yǎng)基中過高的鈣離子濃度會(huì)使鎂和鋅的吸收利用受到干擾。因此，在保證培養(yǎng)基中上述離子濃度滿足要求以外，還需保證上述離子之間種類和比例的平衡。此外，微量元素如鐵、鈷、鎳、硒、碘、銅、鋅、錳、鉻、鉬、氟等對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)代謝和產(chǎn)物合成都有促進(jìn)作用。微量元素在細(xì)胞內(nèi)通常以與有機(jī)物結(jié)合的形式存在。其中鐵在細(xì)胞中參與氧的轉(zhuǎn)運(yùn)；鈷是維生素B12的組成部分，參與葉酸的合成和脂肪酸的合成；鎳能夠激活脫氧核糖核酸酶、乙酰輔酶A合成酶等在細(xì)胞內(nèi)具有重要功能的酶，還具有穩(wěn)定核酸結(jié)構(gòu)的功能；亞硒酸鈉中的硒，作為谷胱甘肽過氧化物酶的輔基，具有抗過氧化物能力，參與消除細(xì)胞內(nèi)的脂肪酸過氧化物，提高細(xì)胞的生長(zhǎng)速率和活性。2.6 其他添加成分在低血清、無血清細(xì)胞培養(yǎng)基中，為滿足細(xì)胞生長(zhǎng)增殖需要，常常添加一些成份：蛋白質(zhì)、多肽、核苷、嘌呤、檸檬酸循環(huán)的中間產(chǎn)物、脂類、及一些血清替代因子等。其中蛋白質(zhì)具有重要的作用，動(dòng)物細(xì)胞對(duì)許多物質(zhì)（難溶于水的離子或脂類物質(zhì)）的攝取需要借助蛋白質(zhì)的傳遞作用，如白蛋白、傳遞蛋白、貼壁蛋白等能夠攜帶脂肪酸、激素、礦物質(zhì)等促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。轉(zhuǎn)鐵蛋白是一種重要的傳遞蛋白，能夠結(jié)合鐵，促進(jìn)細(xì)胞對(duì)鐵離子的吸收，并具有解毒作用，其促生長(zhǎng)作用可能與其具有生長(zhǎng)因子的功能有關(guān)。胰島素可促進(jìn)細(xì)胞對(duì)葡萄糖和氨基酸的利用，商業(yè)化中一些生長(zhǎng)因子以重組蛋白形式添加到培養(yǎng)基中，主要用來刺激細(xì)胞增殖，并可促進(jìn)糖元和脂肪酸的合成。乙醇胺是一種重要的刺激細(xì)胞生長(zhǎng)的化合物，是腦磷酸的合成前提。另外，酚紅作為pH值的指示劑被加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中。酚紅在產(chǎn)物純化過程中會(huì)造成干擾，并且具有一定的固醇類激素樣作用，如雌激素樣作用。當(dāng)用于哺乳類動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)，可能會(huì)發(fā)生一些固醇類反應(yīng)。現(xiàn)在商業(yè)化細(xì)胞培養(yǎng)基中的酚紅含量可根據(jù)需求調(diào)整。因生物反應(yīng)器具有pH在線檢測(cè)技術(shù)，生物反應(yīng)器培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，酚紅可完全去除。2.7 保護(hù)劑細(xì)胞保護(hù)劑是保護(hù)細(xì)胞免受滲透壓變化、剪切力、氧化及氣泡作用等引起的損傷的物質(zhì)。在使用生物反應(yīng)器培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞易被機(jī)械攪拌和通氣鼓泡產(chǎn)生的流體剪切力和氣泡作用所傷害甚至破損死亡。為降低這種損傷，除優(yōu)化生物反應(yīng)器結(jié)構(gòu)和生產(chǎn)工藝外，可在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一些保護(hù)劑。其主要是通過改變細(xì)胞培養(yǎng)基物性或是對(duì)細(xì)胞具有保護(hù)作用的物質(zhì)，常用的種類有血清、白蛋白、聚已二醇（PEG）、非離子性表面活性劑PluronicF68或是其他一些高分子聚合物等。3. 細(xì)胞培養(yǎng)基的理化性質(zhì)動(dòng)物細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)基中不僅能存活，還要分裂增殖，合適的滲透壓、pH值等理化性質(zhì)是細(xì)胞培養(yǎng)基必須具備的前提條件。3.1 pH動(dòng)物細(xì)胞大多數(shù)需要輕微的堿性條件，適宜pH在7.2～7.4之間。細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值通常需經(jīng)校正的pH計(jì)來測(cè)定。在細(xì)胞生長(zhǎng)過程中，隨細(xì)胞數(shù)量的增多和代謝活動(dòng)的加強(qiáng)，二氧化碳不斷被釋放，培養(yǎng)液變酸，pH值發(fā)生變化。酚紅是細(xì)胞培養(yǎng)基中最常用的pH指示劑，但依靠細(xì)胞培養(yǎng)基中的酚紅等pH指示劑進(jìn)行判斷，需要實(shí)驗(yàn)員的經(jīng)驗(yàn)積累，存在較大的主觀性。實(shí)際上，個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基或是無血清細(xì)胞培養(yǎng)基中酚紅含量較少或是不含酚紅，只能通過pH計(jì)或者pH電極進(jìn)行pH值的檢測(cè)，結(jié)果更為準(zhǔn)確可靠。3.2 緩沖能力 細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)具有一定的緩沖能力。細(xì)胞培養(yǎng)過程中造成細(xì)胞培養(yǎng)液 pH 波動(dòng)的主要物質(zhì)是細(xì)胞代謝產(chǎn)生的CO2。在封閉式培養(yǎng)過程中CO2與水結(jié)合產(chǎn)生碳酸，細(xì)胞培養(yǎng)液pH 很快下降；打開培養(yǎng)器具時(shí)CO2逸出則會(huì)引起pH升高。細(xì)胞培養(yǎng)基通常采用NaHCO3-CO2緩沖系統(tǒng)，按下列化學(xué)反應(yīng)方程式調(diào)節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值：H2O + CO2 → H2CO3 ? H+ + HCO3－NaHCO3 ? Na+ + HCO3－此外，還有緩沖能力較高的磷酸鹽緩沖系統(tǒng)。但碳酸鹽緩沖系統(tǒng)的細(xì)胞毒性小、成本低，在細(xì)胞培養(yǎng)中應(yīng)用得更為廣泛。另一種較為常用的緩沖液是HEPES（羥乙基哌嗪乙硫磺酸）液，它是一種非離子兩性緩沖液，在pH 7.0 ~ 7.2范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力。高濃度的HEPES可能對(duì)細(xì)胞有毒性作用，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)HEPES的添加濃度一般為10～25 mmol/L。3.3 滲透壓細(xì)胞必須生活在等滲的環(huán)境中，大多數(shù)體外培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)滲透壓有一定耐受性。研究顯示，對(duì)于大多數(shù)哺乳類動(dòng)物細(xì)胞，滲透壓在260～320 mOsm/kg的范圍內(nèi)都適宜。在生產(chǎn)、配制細(xì)胞培養(yǎng)基的過程中，滲透壓的測(cè)定較為重要，有助于防止在生產(chǎn)、配制過程中出現(xiàn)稱量等方面的錯(cuò)誤。反應(yīng)器高密度培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞過程，在添加碳酸氫鈉的過程中注意滲透壓的監(jiān)控，防止?jié)B透壓過高對(duì)細(xì)胞的損害。3.4 溫度溫度對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)基有較大的影響，溫度過高可引起營(yíng)養(yǎng)成份的降解或破壞，細(xì)胞培養(yǎng)基的pH、離子強(qiáng)度和電解常數(shù)pKa也可能受到影響。如細(xì)胞培養(yǎng)液中的谷氨酰胺，在高溫條件下降解的速度較快，如35 ℃貯存時(shí)，放置3天降解25 %左右，在4 ℃貯存3周降解約20%。3.5 粘滯性及表面張力含血清細(xì)胞培養(yǎng)液的粘滯性主要是由血清引起的，在轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)貼壁細(xì)胞時(shí)，培養(yǎng)液的粘滯性對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)沒有多大影響；但在生物反應(yīng)器懸浮培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)液的粘滯性則直接影響攪拌轉(zhuǎn)速控制及攪拌剪切力對(duì)細(xì)胞造成的損傷程度。表面張力對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)有較大的作用，尤其在利用生物反應(yīng)器進(jìn)行懸浮培養(yǎng)時(shí)，攪拌和通氣都會(huì)引起泡沫的產(chǎn)生。對(duì)于含血清培養(yǎng)液，由于血清中多種蛋白的存在，攪拌時(shí)產(chǎn)生的氣泡較多，氣泡的上升運(yùn)動(dòng)對(duì)細(xì)胞的損傷程度還有爭(zhēng)議，但氣泡的破裂對(duì)細(xì)胞有明顯的損傷作用。為降低這種損傷，可通過在細(xì)胞培養(yǎng)基中添加一些保護(hù)劑，降低細(xì)胞-氣體和細(xì)胞-液體的表面張力，減少氣泡的形成。4. 細(xì)胞培養(yǎng)基的滅菌及儲(chǔ)存4.1不同細(xì)胞培養(yǎng)基的除菌方式及注意事項(xiàng)細(xì)胞培養(yǎng)基滅菌的方式分為高壓滅菌和膜過濾除菌，不同的培養(yǎng)基由于其營(yíng)養(yǎng)成份不同，滅菌方式也可能不同。① 高壓滅菌某些培養(yǎng)基（如MEM）可進(jìn)行高壓滅菌，這類培養(yǎng)基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉，一般是在培養(yǎng)基高壓滅菌后才加入。另外可用耐高壓的谷氨酸鹽（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）代替L-谷氨酰胺?？筛邏簻缇呐囵B(yǎng)基在121℃、15 psi，15分鐘的條件下完全可達(dá)到滅菌效果及營(yíng)養(yǎng)成分的最小損失，不需將滅菌時(shí)間延長(zhǎng)。絕大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)基不適宜高壓滅菌。因培養(yǎng)液中常含有維生素、蛋白質(zhì)、多肽、生長(zhǎng)因子等物質(zhì)，這些物質(zhì)在高溫或射線照射下易發(fā)生變性或失去功能，因而上述液體多采用過濾消毒以除去細(xì)菌。可供過濾滅菌使用的濾膜很多，其材料多為polyethersulphone（PES）、尼龍、多聚碳酸鹽、醋酸纖維素、硝酸纖維素、PTFE、陶瓷等。膜過濾除菌是當(dāng)前較為常用及便捷的一種方法，常采用0.2 μm孔徑的濾膜，部份采用0.1 μm孔徑。與高壓過濾方式相比，濾膜具有使用期限且價(jià)格較高，但對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成份破壞性較小。4.2 不同細(xì)胞培養(yǎng)基存儲(chǔ)過程中的注意事項(xiàng)通常液體細(xì)胞培養(yǎng)基避免-20 ℃凍存，因?yàn)榻鈨鰰r(shí)可能會(huì)有營(yíng)養(yǎng)成份析出，影響培養(yǎng)效果。正常情況下于2 ~ 8 ℃避光保存，使用前從冰箱取出，放入室溫進(jìn)行平衡。通常的液體培養(yǎng)基有效期是6個(gè)月到12個(gè)月。液體細(xì)胞培養(yǎng)基盡量避免長(zhǎng)期貯存，其中的谷氨酰胺會(huì)隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)而慢慢分解，如果細(xì)胞生長(zhǎng)不良，可考慮檢測(cè)培養(yǎng)基中的谷氨酰胺含量確定是否再補(bǔ)加谷氨酰胺。市售商業(yè)化液體細(xì)胞培養(yǎng)基有具體的有效期，對(duì)于使用干粉細(xì)胞培養(yǎng)基自行配制成液體以后，也應(yīng)低溫（2 ~ 8 ℃）貯存。除培養(yǎng)基中如谷氨酰胺易降解之外，培養(yǎng)基中的其他成份隨著溫度的升高也可能會(huì)發(fā)生降解或是析出。5. 細(xì)胞培養(yǎng)基使用過程中常見問題分析5.1 細(xì)胞培養(yǎng)基的緩沖系統(tǒng)選擇及pH變化問題 由于大多數(shù)細(xì)胞適宜的pH為7.0~7.4，偏離此范圍可能對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)產(chǎn)生有害的影響。但各種細(xì)胞對(duì)pH的要求也不完全相同，原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般對(duì)pH變動(dòng)耐受力差，無限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。因此，原代培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)液中的緩沖系統(tǒng)就顯得較為重要。一般的細(xì)胞培養(yǎng)基采用的都是平衡鹽系統(tǒng)，但不同的培養(yǎng)基或是同一系列的培養(yǎng)基所用平衡鹽系統(tǒng)不同，如199系列、MEM系列均有Hanks’系統(tǒng)的培養(yǎng)基及Earle’s系統(tǒng)的培養(yǎng)基。有些培養(yǎng)基不是上述常規(guī)的平衡鹽系統(tǒng)，例如RPMI1640培養(yǎng)基、F12培養(yǎng)基。MEM低血清培養(yǎng)基的平衡鹽系統(tǒng)也不是常規(guī)的平衡鹽系統(tǒng)，該平衡鹽系統(tǒng)的緩沖能力強(qiáng)于常規(guī)平衡鹽系統(tǒng)的緩沖能力。 細(xì)胞培養(yǎng)過程中pH值下降產(chǎn)生的原因有很多。在細(xì)胞生長(zhǎng)非?？鞎r(shí)，pH值通常下降得很快，此時(shí)可以通過及時(shí)傳代、提高傳代比例或降低血清量等方法進(jìn)行解決。此外，培養(yǎng)瓶蓋擰得過緊、NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖能力不夠、培養(yǎng)液中鹽濃度不正確、細(xì)菌、酵母或真菌污染等也能導(dǎo)致pH值通常下降得很快。這時(shí)，可以通過以下幾種方法解決： 1）增加培養(yǎng)液中NaHCO3濃度或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度。NaHCO3含量在2.0 g/L到3.7 g/L之間時(shí)對(duì)應(yīng)的CO2濃度為5~10%；2) 改用不依賴CO2培養(yǎng)液；3) 適當(dāng)松開瓶蓋。在培養(yǎng)液中加HEPES緩沖液，使終濃度為10~25 mM；4) 在CO2培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle’s鹽配制的培養(yǎng)液，在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hanks’鹽配制的培養(yǎng)液；5) 如果是污染造成的則丟棄培養(yǎng)物或用抗生素除菌。5.2 細(xì)胞培養(yǎng)基常用幾種重要的添加成份及使用過程中應(yīng)注意的問題酚紅在細(xì)胞培養(yǎng)基中用作pH值的指示劑。一般情況下，可以通過酚紅的指示作用判斷培養(yǎng)基的pH值，但低血清或是無血清細(xì)胞培養(yǎng)基中酚紅的含量與普通細(xì)胞培養(yǎng)基中的酚紅含量不同，不能通過肉眼觀察或通過經(jīng)驗(yàn)來判定pH值，建議使用pH計(jì)進(jìn)行測(cè)定。酚紅通常對(duì)含血清的細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)的生物制品質(zhì)量并不會(huì)產(chǎn)生明顯影響，也可通過純化技術(shù)去除，但酚紅在無血清細(xì)胞培養(yǎng)基中可能帶來胞內(nèi)鈉/鉀失衡，影響細(xì)胞生長(zhǎng)。碳酸氫鈉在細(xì)胞培養(yǎng)基中主要是作為緩沖系統(tǒng)，此外還具有調(diào)節(jié)滲透壓的作用。通常產(chǎn)品使用說明中的碳酸氫鈉推薦量是一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)、安全量，是在科學(xué)的基礎(chǔ)上根據(jù)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)所得。但是由于不同的細(xì)胞系（株）不同，同一株細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境也可能不同（細(xì)胞耐受性不同等），且存在的地域性水質(zhì)差異等，在實(shí)際生產(chǎn)過程中也可稍作改動(dòng)，但使用者需做相應(yīng)的檢測(cè)（理化及細(xì)胞生產(chǎn)試驗(yàn)等）。HEPES是一種非離子緩沖液，在pH 7.2 ～7.4范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力，在高濃度時(shí)對(duì)一些細(xì)胞可能有毒。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉（0.34 g /L）共用，以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加。其安全濃度范圍是10～25 mmol/L。丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是在沒有葡萄糖的條件下，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，4 ℃下放置1周可分解50 %，使用中最好單獨(dú)配制，置-20 ℃冰箱中保存，使用前加入細(xì)胞培養(yǎng)液中。原文：全面解讀細(xì)胞培養(yǎng)基！發(fā)布于 2020-09-27 14:25細(xì)胞生物學(xué)腫瘤細(xì)胞干細(xì)胞?贊同 165??9 條評(píng)論?分享?喜歡?收藏?申請(qǐng)轉(zhuǎn)載?文章被以下專欄收錄細(xì)胞培養(yǎng)俱樂部細(xì)胞技術(shù)維基
培養(yǎng)基的分類，史上最全介紹（摘抄微生物培養(yǎng)基使用手冊(cè)）_medium_成分_瓊脂
培養(yǎng)基的分類，史上最全介紹（摘抄微生物培養(yǎng)基使用手冊(cè)）_medium_成分_瓊脂
新聞
體育
汽車
房產(chǎn)
旅游
教育
時(shí)尚
科技
財(cái)經(jīng)
娛樂
更多
母嬰
健康
歷史
軍事
美食
文化
星座
專題
游戲
搞笑
動(dòng)漫
寵物
無障礙
關(guān)懷版
培養(yǎng)基的分類，史上最全介紹（摘抄微生物培養(yǎng)基使用手冊(cè)）
2022-05-30 11:29
來源:
環(huán)凱微生物
發(fā)布于：廣東省
原標(biāo)題：培養(yǎng)基的分類，史上最全介紹（摘抄微生物培養(yǎng)基使用手冊(cè)）
由于微生物的種類繁多，對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求各不相同，所需要的培養(yǎng)基成分復(fù)雜，品種繁多，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，目前常用的培養(yǎng)基約有1700余種，而且，隨著生物科學(xué)的發(fā)展，培養(yǎng)基的種類也在不斷增加。培養(yǎng)基的分類方法目前尚未統(tǒng)一，一般常按培養(yǎng)基的成分、物理狀態(tài)、用途等加以區(qū)分。
一、按成分分類
1、天然培養(yǎng)基( native medium)
2、合成培養(yǎng)基(synthetic medium)
二、按形態(tài)分類
1、液體培養(yǎng)基(liquid nutrient medium)
2、流體培養(yǎng)基(semi-liquid medium)
3、半固體培養(yǎng)基(half-solid medium)
4、固體培養(yǎng)基(solid medium)
三、按用途分類
1、基礎(chǔ)培養(yǎng)基(basic media)
2、營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基(nutrient media)
3、增菌培養(yǎng)基(enrichment media)
4、選擇性培養(yǎng)基(selective media)
5、鑒別培養(yǎng)基(differential media)
6、厭氧菌培養(yǎng)基(anaerobic media)
展開全文
7、細(xì)胞培養(yǎng)液(liquid of culture cellulae)
一、按成分分類
根據(jù)培養(yǎng)基的組成成分，可分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基兩大類。
1、天然培養(yǎng)基(native medium) 含有不完全明了化學(xué)成分的天然物質(zhì)。如蛋白胨、牛肉膏(粉)、肉浸液、玉米漿、血液、馬鈴薯等。用此類材料配成的培養(yǎng)基很難做到不同批號(hào)之間質(zhì)量的穩(wěn)定一致，因此在選用原料時(shí)務(wù)必注明其商品名稱、生產(chǎn)廠家及批號(hào)，對(duì)不同來源的原料應(yīng)先做小樣試驗(yàn)。此種培養(yǎng)基成本較低，細(xì)菌繁殖較好，一般細(xì)菌培養(yǎng)以選用天然培養(yǎng)基為主。
2、合成培養(yǎng)基(synthetic medium) 由已知化學(xué)成分的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)組成的培養(yǎng)基。根據(jù)微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求的不同，可完全由無機(jī)鹽或化合物組成，如：氨基酸、糖、嘌呤、嘧啶、維生素等，其組成成分已知，只要嚴(yán)格操作，各批次間質(zhì)量可做到穩(wěn)定一致。此培養(yǎng)基可用來檢測(cè)某種營(yíng)養(yǎng)物或藥物對(duì)微生物代謝的影響。組織細(xì)胞培養(yǎng)液均屬合成培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基的成本較高，其價(jià)格相當(dāng)于同類天然培養(yǎng)基的幾倍以至于幾十倍。只含幾種無機(jī)鹽的合成培養(yǎng)基，僅適用于自養(yǎng)菌的培養(yǎng)，如培養(yǎng)亞硝化細(xì)菌、氧化硫桿菌等的培養(yǎng)基。有些培養(yǎng)基大部分成分為已知化學(xué)結(jié)構(gòu)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，其中的個(gè)別或少數(shù)成分為未明化學(xué)成分的必須營(yíng)養(yǎng)物，成為半合成培養(yǎng)基，如百日咳菌苗生產(chǎn)用的水解酪素培養(yǎng)基。
二、按形態(tài)分類
培養(yǎng)基按其不同的物理狀態(tài)，可分為液體、流體、半固體和固體4類，培養(yǎng)基的物理狀態(tài)取決于培養(yǎng)基中是否加人凝固劑或凝固劑的加入量。
1、液體培養(yǎng)基(liquid nutrient medium) 不加任何凝固劑，常溫下以完全液態(tài)存在的培養(yǎng)基，如肉湯培養(yǎng)基或一般液體增菌培養(yǎng)基。
2、流體培養(yǎng)基(semi-liquid medium) 在液體培養(yǎng)基中加入0.05%~0.1%的瓊脂粉，使其具一定黏度，即成流體培養(yǎng)基。加入瓊脂粉增加了培養(yǎng)基的黏度，降低空氣中的氧氣進(jìn)人培養(yǎng)基的速度，能使培養(yǎng)基保持較長(zhǎng)時(shí)間的厭氧條件，有利于一般厭氧菌的生長(zhǎng)繁殖，如硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基等。一般用于霉菌和厭氧菌檢查的液體培養(yǎng)基中可加人少量瓊脂使其成為流體培養(yǎng)。
3、半固體培養(yǎng)基(half-solid medium) 在液體培養(yǎng)基中加人0.2%~0.5%的瓊脂粉，加熱溶解后冷卻即成，以倒置不流動(dòng)的最軟狀態(tài)為宜，一般供細(xì)菌動(dòng)力試驗(yàn)、菌種傳代、保存和儲(chǔ)運(yùn)標(biāo)本之用。
4、固體培養(yǎng)基(solid medium) 培養(yǎng)基中含有足量的凝固劑(瓊脂粉>0.5%)，在常溫下能保持固體狀態(tài)。此類培養(yǎng)基大都用于微生物的分離、純化、藥敏試驗(yàn)及菌苗制造。如營(yíng)養(yǎng)瓊脂、營(yíng)養(yǎng)斜面、SS瓊脂、TCBS瓊脂等。此外，還有一些特殊用途的培養(yǎng)基，如用血清或雞蛋做凝固劑配成的呂氏血清斜面培養(yǎng)基、雞蛋斜面培養(yǎng)基等。
三、按用途分類
根據(jù)用途不同，培養(yǎng)基可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基、增菌培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基、厭氧菌培養(yǎng)基等。
1、基礎(chǔ)培養(yǎng)基(basic media) 大多數(shù)微生物共同需要的營(yíng)養(yǎng)基礎(chǔ)。某--微生物如有特殊需要，可在此基礎(chǔ)上添加某種成分即可，如蛋白胨水、肉湯培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂等。1%蛋白胨水培養(yǎng)基便是一個(gè)最簡(jiǎn)單的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，該基礎(chǔ)培養(yǎng)基本身可供一般細(xì)菌增菌培養(yǎng)和靛基質(zhì)試驗(yàn)用，若再加入指示劑和糖類，則配成糖發(fā)酵培養(yǎng)基，供糖發(fā)酵試驗(yàn)用，成為鑒別培養(yǎng)基；若在1%蛋白胨水中增加氯化鈉用量并將pH提高到8.6左右，則變成堿性蛋白胨水，用于霍亂弧菌的增菌培養(yǎng)，成為專用增菌培養(yǎng)基。
2、營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基(nutrient media) 在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加一些特殊的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如葡萄糖、血液、血清、酵母浸膏、生長(zhǎng)因子等，可供營(yíng)養(yǎng)要求較高的細(xì)菌在其中生長(zhǎng)。例如鏈球菌、肺炎鏈球菌等需在含血液或血清的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)；結(jié)核分枝桿菌的培養(yǎng)基中須添加雞蛋、馬鈴薯、甘油等。最常用的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基是血瓊脂平板。
3、增菌培養(yǎng)基(enrichment media) 一般為液體培養(yǎng)基，用于細(xì)菌的增菌培養(yǎng)，可泛用，也可專用，在專用增菌培養(yǎng)基中常含有目的菌生長(zhǎng)所需要的特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)或生長(zhǎng)因子。
4、選擇性培養(yǎng)基(selective media) 選擇性培養(yǎng)基含有營(yíng)養(yǎng)物(增菌劑)和抑菌劑(選擇劑)，標(biāo)本接種于此類培養(yǎng)基后，由于抑菌劑的選擇性抑制作用，使非目的菌受到不同程度的抑制，更有利于目的菌的增殖或分離。利用選擇性培養(yǎng)基經(jīng)過一定時(shí)間的增菌培養(yǎng)，再接種于選擇性鑒別培養(yǎng)基，可以提高目的菌的陽性檢出率。抑菌劑的種類很多，常用的有孔雀綠、燦爛綠、亞硒酸鈉、去氧膽酸鈉、膽鹽、四硫磺酸鈉、各種抗生素等。抑菌劑的加入量要適宜、準(zhǔn)確，有的劇毒，有的不耐高熱，配制時(shí)須特別注意。
5、鑒別培養(yǎng)基(differential media) 在培養(yǎng)基中加入某一反應(yīng)底物和指示劑，以區(qū)別某些微生物的特性從而鑒別之。又分一般鑒別培養(yǎng)基和選擇性鑒別培養(yǎng)基。只用于區(qū)別不同微生物種類的培養(yǎng)基稱為-般鑒別培養(yǎng)基，此類培養(yǎng)基中一般不加抑菌劑而只含指示劑，如克氏雙糖鐵培養(yǎng)基，含有葡萄糖及乳糖，以酚紅作為指示劑，觀察培養(yǎng)基底層與斜面的顏色變化判定細(xì)菌對(duì)葡萄糖和乳糖的發(fā)酵能力，加人檸檬酸鐵銨，培養(yǎng)后觀察是否產(chǎn)生黑色沉著以判定細(xì)菌是否分解蛋白胨中的含硫氨基酸而產(chǎn)生硫化氫；又如伊紅-美藍(lán)瓊脂，含有乳糖(反應(yīng)底物)、伊紅-美藍(lán)(指示劑)用以鑒別大腸埃希菌、腸道病原菌和其他雜菌。一般鑒別培養(yǎng)基的特點(diǎn)是在配方中都含有指示劑，并可用于區(qū)別不同種類的微生物，有些鑒別培養(yǎng)基也可同時(shí)作為細(xì)菌的特殊需要用來分離培養(yǎng)某些細(xì)菌，如胰酪胨大豆瓊脂和巧克力色血瓊脂。
在培養(yǎng)基中加人某種抑制劑和指示劑，抑制某些細(xì)菌生長(zhǎng)，促進(jìn)目的菌的繁殖，并使所生長(zhǎng)的細(xì)菌菌落具有一定特征，以助鑒別挑選，這類培養(yǎng)基稱為選擇性鑒別培養(yǎng)基。如SS瓊脂，在該培養(yǎng)基配方中含有乳糖(反應(yīng)底物)、中性紅和檸檬酸鐵銨(指示劑)、燦爛綠及膽鹽等(抑菌劑)。燦爛綠和膽鹽等抑菌劑能抑制革蘭氏陽性菌及部分大腸埃希菌的生長(zhǎng)，而對(duì)沙門菌及志賀菌基本無影響，而且大腸埃希菌能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸，使菌落變紅色，沙門菌和志賀菌不發(fā)酵乳糖，其菌落為無色。如細(xì)菌產(chǎn)生硫化氫，則與檸檬酸鐵銨反應(yīng)生成硫化亞鐵沉淀，菌落中心呈黑色或褐色。以此達(dá)到鑒別的目的。
近年來，國(guó)內(nèi)外利用某些細(xì)菌特有的酶，選擇相應(yīng)的作用底物，研制出某些細(xì)菌專用的顯色培養(yǎng)基，用于細(xì)菌的分離鑒別，收到了良好的效果，這種顯色培養(yǎng)基實(shí)際上也是鑒別培養(yǎng)基。其基本原理是將色原(或熒光原)與細(xì)菌作用底物的結(jié)合物加于培養(yǎng)基中，當(dāng)細(xì)菌含有相應(yīng)酶時(shí)，使該結(jié)合物分解而顯色(或顯示熒光)。如色原糖苷結(jié)合物在糖苷酶作用下分解，使糖苷與色原分離，并顯示顏色；熒光氨基酸結(jié)合物(不顯熒光)在氨基肽酶作用下，使氨基酸與熒光物質(zhì)分離而顯示熒光。常用顯色的色原有α-萘酚、β-萘酚、鄰位硝基酚、對(duì)位硝基酚、對(duì)硝基苯胺、酚酞、2-氨基4-硝基苯等；常用的熒光物有4-甲基傘形酮(又稱7 -羥基4-甲基香豆素)等。目前，顯色培養(yǎng)基已用于多種細(xì)菌或真菌的分離鑒別培養(yǎng)，如沙門菌、大腸埃希菌、李斯特菌、雙歧桿菌和乳酸桿菌、白色念珠菌等顯色培養(yǎng)基。
還有一些鑒別性培養(yǎng)基，是利用細(xì)菌特有的各種酶系統(tǒng)，能分解利用各種特定的糖、醇、氨基酸或其他基質(zhì)而產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、產(chǎn)堿或產(chǎn)生其他可見物質(zhì)，依此進(jìn)行細(xì)菌的鑒別，例如常用的生化培養(yǎng)基。
用于細(xì)菌生化特性試驗(yàn)的培養(yǎng)基特點(diǎn)是在無糖的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加人某種特定的基質(zhì)，并加人指示劑，細(xì)菌在此類培養(yǎng)基中的一系列生化反應(yīng)結(jié)果，均通過指示劑最終顯示出來。此類培養(yǎng)基為生化反應(yīng)鑒別培養(yǎng)基。根據(jù)用量又可分為常量生化培養(yǎng)基和微量生化培養(yǎng)基。值得注意的是生化試驗(yàn)培養(yǎng)基的某些成分受高溫、pH等諸多因素的影響，在配制和使用時(shí)，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況嚴(yán)格掌握，防止有效成分被破壞，以保障其使用效果。
6、厭氧菌培養(yǎng)基(anaerobic media) 供厭氧菌的分離、培養(yǎng)和鑒別用的培養(yǎng)基，稱為厭氧菌培養(yǎng)基。由于厭氧菌自身缺乏有氧代謝所必需的各種酶，如細(xì)胞色素和細(xì)胞色素氧化酶、過氧化氫酶和過氧化物酶、超氧化歧化酶，所以造成自身代謝的缺陷，無法進(jìn)行有氧代謝，而無氧酵解所產(chǎn)生的能量又不足，因此厭氧菌在正常的大氣環(huán)境下不能生長(zhǎng)和生存。為使厭氧菌能正常生長(zhǎng)，必須制備營(yíng)養(yǎng)成分豐富，氧化還原電勢(shì)較低，具有特殊生長(zhǎng)因子的專用培養(yǎng)基。
通常用心、腦或其他臟器浸液配制厭氧菌培養(yǎng)基，并常需加入硫乙醇酸鈉、半胱氨酸、肉渣、還原鐵、活性炭等還原劑或除氧材料。在液體培養(yǎng)基中還可加入刃天青或亞甲基藍(lán)作為氧化還原指示劑，以觀察培養(yǎng)基的含氧程度。心、腦浸液、肝塊、肉渣中含有不飽和脂肪酸，能吸收培養(yǎng)基中的氧。硫乙醇酸鈉、半胱氨酸是較強(qiáng)的還原劑，能消耗溶解在培養(yǎng)基中的氧。干燥的活性炭和脫脂棉同樣能吸收培養(yǎng)基中的氧。所以培養(yǎng)基中加入還原劑和吸收材料，目的都是為造成培養(yǎng)基的缺氧環(huán)境，使培養(yǎng)基保持較低的氧化還原電勢(shì)。此外，還可在培養(yǎng)基表面加一層液體石蠟，以隔絕培養(yǎng)基與大氣的接觸。
7、細(xì)胞培養(yǎng)液(liquid of culture cellulae) 是指用于各種目的的體外培養(yǎng)、保存、運(yùn)輸活組織、器官及細(xì)胞的液體，實(shí)質(zhì)為人工模擬體內(nèi)生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，使細(xì)胞在此環(huán)境中有生長(zhǎng)和繁殖的能力。由于其成分?jǐn)?shù)量明確并可通過調(diào)節(jié)某一種成分來觀察被研究對(duì)象的各種生物學(xué)改變，被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)科的研究。細(xì)胞培養(yǎng)液的組成成分主要有水、氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)離子、生長(zhǎng)因子等，這些成分必須通過嚴(yán)格挑選，嚴(yán)格測(cè)試后方可使用，所用的水必須達(dá)到2級(jí)試驗(yàn)用水(CB/T 6682-1992)，所用的器皿必須清潔無污并進(jìn)行高壓滅菌或干烤去熱源處理。返回搜狐，查看更多
責(zé)任編輯：
平臺(tái)聲明：該文觀點(diǎn)僅代表作者本人，搜狐號(hào)系信息發(fā)布平臺(tái)，搜狐僅提供信息存儲(chǔ)空間服務(wù)。
閱讀 ()
推薦閱讀
細(xì)胞學(xué)堂 | 細(xì)胞培養(yǎng)基的種類以及如何選擇 - 知乎
細(xì)胞學(xué)堂 | 細(xì)胞培養(yǎng)基的種類以及如何選擇 - 知乎首發(fā)于細(xì)胞學(xué)堂切換模式寫文章登錄/注冊(cè)細(xì)胞學(xué)堂 | 細(xì)胞培養(yǎng)基的種類以及如何選擇普諾賽生物細(xì)胞培養(yǎng)基既是培養(yǎng)細(xì)胞中供給細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞生殖增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。本期為大家整理了常見的細(xì)胞培養(yǎng)基種類，接下來我們一起來了解一下這些培養(yǎng)基和適用的細(xì)胞類型及選擇方法。一、常見的細(xì)胞培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基（MM）基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)鹽和其它一些輔助物質(zhì)。合成培養(yǎng)基使用時(shí)還需添加一定量的血清使細(xì)胞保持良好的生長(zhǎng)狀態(tài)。培養(yǎng)基的種類有很多，其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12是應(yīng)用較為廣泛的。其他如M199、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于某些細(xì)胞的培養(yǎng)。具體的特征及應(yīng)用如下：培養(yǎng)基特征應(yīng)用BME細(xì)胞培養(yǎng)基1955年Eagle設(shè)計(jì)，以BSS為基礎(chǔ)，添加8種維生素，13種氨基酸，成分簡(jiǎn)單、便于添加適于各種細(xì)胞系和特殊研究用，在此基礎(chǔ)上改良的細(xì)胞培養(yǎng)基品種有MEM、DMEM、IMDM等MEM細(xì)胞培養(yǎng)基由Harry Eagle在Eagle基本培養(yǎng)基（BEM）的基礎(chǔ)上發(fā)展而來的。MEM培養(yǎng)基僅含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素，成分簡(jiǎn)單，主要用于貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)，1959年修改配方，刪去賴氨酸、生物素，增加氨基酸濃度，配方修改后也可用于其他類型細(xì)胞培養(yǎng)適合多種細(xì)胞單層生長(zhǎng)，是一種最基本、適用范圍最廣的培養(yǎng)基。因其營(yíng)養(yǎng)成分所限，針對(duì)生產(chǎn)之特定細(xì)胞培養(yǎng)與表達(dá)時(shí)，并不一定是使用效果最佳或者最經(jīng)濟(jì)的培養(yǎng)基。此外，MEM細(xì)胞培養(yǎng)基有含Earle's平衡鹽的類型，也有含Hanks'平衡鹽的類型；有高壓滅菌型的，也有過濾除菌型的；還有含非必需氨基酸的類型。應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況注意選擇合適的 MEM 細(xì)胞培養(yǎng)基M199細(xì)胞培養(yǎng)基1950 年由 Morgan 等設(shè)計(jì)，除 BSS 外，含有53 種成分添加適量的血清后，可廣泛用于多種細(xì)胞培養(yǎng)，可用于病毒學(xué)、疫苗生產(chǎn)以及大鼠胰腺上皮細(xì)胞和小鼠晶狀體組織的培養(yǎng)DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基由Dulbecco改良的 Eagle 培養(yǎng)基，DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍，維生素濃度是MEM的4倍，同時(shí)還增加了非必須氨基酸、微量鐵離子以及丙酮酸鈉。分低糖型（1000mg/L）、高糖型（4500mg/L）常用于雜交瘤的骨髓瘤細(xì)胞和 DNA 轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)。例如 CHO 細(xì)胞表達(dá)生產(chǎn)乙肝疫苗、CHO 細(xì)胞表達(dá)EPOIMDM細(xì)胞培養(yǎng)基由Iscove's改良的Eagle培養(yǎng)基，IMDM培養(yǎng)基在DMEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加了硒、HEPES、丙酮酸鈉以及額外的氨基酸和維生素，營(yíng)養(yǎng)非常豐富可用于雜交瘤細(xì)胞和高密度細(xì)胞的快速培養(yǎng)RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制，針對(duì)淋巴細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)計(jì)，BSS＋21種氨基酸＋維生素11種等成分廣泛應(yīng)用于各種正常細(xì)胞和癌細(xì)胞的培養(yǎng)，尤其是懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)Ham's F10、F12細(xì)胞培養(yǎng)基1963年、1969年由Ham設(shè)計(jì)，含微量元素，Ham's F-12以Ham's F-10營(yíng)養(yǎng)混合物為基礎(chǔ)設(shè)計(jì)而成的，可在血清含量低時(shí)用F10適用于倉鼠、人二倍體細(xì)胞，F(xiàn)12適用于CHO細(xì)胞。在低血清含量下時(shí)，特別適合單細(xì)胞培養(yǎng)和克隆化培養(yǎng)，添加血清后也廣泛應(yīng)用于癌細(xì)胞和原代細(xì)胞的培養(yǎng)，如大鼠肝細(xì)胞、大鼠前列腺上皮細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、大鼠成肌細(xì)胞、雞胚胎細(xì)胞等DMEM/F12細(xì)胞培養(yǎng)基在DMEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加F12培養(yǎng)基中更為豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，含有多種微量元素廣泛應(yīng)用于多種哺乳類細(xì)胞的培養(yǎng)。同時(shí)，常作為開發(fā)無血清培養(yǎng)基的基礎(chǔ)，也適用于低血清含量下哺乳動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)以及克隆密度培養(yǎng)McCoy's 5A培養(yǎng)基Thomas McCoy等人在1959年設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基，最初專門用于Novikoff Hepatoma細(xì)胞的培養(yǎng)。McCoy's 5A培養(yǎng)基是改良的Basal Medium 5A，與其他培養(yǎng)基不同的是，McCoy's 5A含有還原型谷胱甘肽、細(xì)菌蛋白胨以及高濃度的葡萄糖McCoy's 5A廣泛用于多種類型的原代細(xì)胞的培養(yǎng)，如骨髓、皮膚、牙齦、腎、脾、肺、大鼠胚胎、網(wǎng)膜等。此外McCoy's 5A培養(yǎng)基還用于組織活檢培養(yǎng)、細(xì)胞建系，以及一些淋巴細(xì)胞和較難培養(yǎng)的細(xì)胞的培養(yǎng)L15細(xì)胞培養(yǎng)基L-15培養(yǎng)基的緩沖系統(tǒng)由磷酸鹽和游離堿基氨基酸組成，代替了傳統(tǒng)的碳酸氫鈉緩沖系統(tǒng)，同時(shí)，用半乳糖和丙酮酸鈉代替葡萄糖可以防止酸性代謝副產(chǎn)物的形成，有助于維持培養(yǎng)液PH的穩(wěn)定，適合用于非CO2平衡環(huán)境的細(xì)胞培養(yǎng)L-15培養(yǎng)基適用于猴腎細(xì)胞和HEP-2的培養(yǎng)、原代（如胚胎和成人組織）細(xì)胞分離、多種病毒的培養(yǎng)以及神經(jīng)元的培養(yǎng)等完全培養(yǎng)基（CM）完全培養(yǎng)基是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加了血清、抗生素等物質(zhì)，也叫（血清）細(xì)胞培養(yǎng)基。其中大部分細(xì)胞培養(yǎng)常用的是牛血清，因?yàn)榕Ｑ逯泻写龠M(jìn)細(xì)胞增殖的各種生長(zhǎng)因子。此外為防止污染，培養(yǎng)液中尚需加一定量的抗生素。完全培養(yǎng)基根據(jù)添加血清量的多少，可分為細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基和細(xì)胞維持培養(yǎng)基，用于不同細(xì)胞和不同研究。無血清細(xì)胞培養(yǎng)基（SFM）無血清培養(yǎng)基是指在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上引入成分完全明確或部分明確的血清替代成分，主要是由基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加物（替代血清的補(bǔ)充因子）組成。其主要成分為下列幾種：黏附因子約有80%的細(xì)胞是屬于貼附型生長(zhǎng)。一般的細(xì)胞培養(yǎng)基是利用血清作為其來源，在無血清培養(yǎng)基中，細(xì)胞黏附因子就是很重要的物質(zhì)。生長(zhǎng)因子生長(zhǎng)因子是維持細(xì)胞活性與促進(jìn)細(xì)胞增生、遷移、分化等，不可或缺的要素。酶抑制劑貼附型細(xì)胞一般多以胰蛋白酶（trypsin）進(jìn)行傳代。在一般細(xì)胞培養(yǎng)中，血清中含有抑制trypsin的成分，所以無血清培養(yǎng)基必須添加trypsin抑制劑。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)之前，要留有種子細(xì)胞，種子細(xì)胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中，以保證細(xì)胞的特性不發(fā)生變化。優(yōu)點(diǎn)：01 未知組分少；02 避免血清對(duì)細(xì)胞的毒性作用和血清源性污染；03 雜蛋白含量少，避免血清成分影響研究結(jié)果或是產(chǎn)品制程，提高產(chǎn)品表達(dá)水平并易于純化。缺點(diǎn)：01 無血清培養(yǎng)基成本較高；02 不是所有的細(xì)胞都能在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)；03 細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中易受某些機(jī)械因素和化學(xué)因素的影響，培養(yǎng)基保存和應(yīng)用方面局限性很大。二、細(xì)胞培養(yǎng)基的選擇細(xì)胞培養(yǎng)基的種類很多，如何選擇適宜的培養(yǎng)基是細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵。在此提供以下建議可供參考：01 如果是新購(gòu)買的細(xì)胞，可以向細(xì)胞株的廠家咨詢，或者詢問引種來源查找細(xì)胞庫上對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)基；02 根據(jù)細(xì)胞的特點(diǎn)及實(shí)驗(yàn)的需要來選擇培養(yǎng)基；03 自己試驗(yàn)，用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，做生長(zhǎng)曲線，記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)速度，觀察細(xì)胞的形態(tài)變化，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇最佳培養(yǎng)基。培養(yǎng)基種類和細(xì)胞系并不是一個(gè)強(qiáng)制的對(duì)應(yīng)關(guān)系。具體培養(yǎng)細(xì)胞使用什么培養(yǎng)基，主要還是根據(jù)數(shù)據(jù)庫、文獻(xiàn)和經(jīng)驗(yàn)哦！發(fā)布于 2023-12-12 14:54?IP 屬地湖北細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)基細(xì)胞培養(yǎng)?贊同 2??添加評(píng)論?分享?喜歡?收藏?申請(qǐng)轉(zhuǎn)載?文章被以下專欄收錄細(xì)
15種細(xì)胞培養(yǎng)中常用培養(yǎng)基及基本特性 - 實(shí)驗(yàn)方法 - 丁香通
15種細(xì)胞培養(yǎng)中常用培養(yǎng)基及基本特性 - 實(shí)驗(yàn)方法 - 丁香通
丁香通
丁香園
論壇
丁香客
醫(yī)藥招聘
丁香醫(yī)生
更多
會(huì)議
調(diào)查派
用藥助手
丁當(dāng)鋪
丁香搜索
醫(yī)藥數(shù)據(jù)庫
來問醫(yī)生
我要登錄
|
免費(fèi)注冊(cè)
|
我的丁香通
賣家：
成為賣家
更多合作
買家：
買家中心
移動(dòng)端
發(fā)布求購(gòu) 用戶服務(wù)
產(chǎn)品 實(shí)驗(yàn) 品牌
搜索
搜產(chǎn)品
搜產(chǎn)品
搜實(shí)驗(yàn)
搜品牌
大家都在搜
免費(fèi)發(fā)布求購(gòu)
搜索
發(fā)布求購(gòu)
全部產(chǎn)品分類
首頁
丁香實(shí)驗(yàn)new
促銷
試用中心
學(xué)術(shù)專區(qū)
資訊
品牌學(xué)堂
丁香學(xué)社
首頁 實(shí)驗(yàn)方法 細(xì)胞技術(shù) 細(xì)胞功能測(cè)定 15種細(xì)胞培養(yǎng)中常用培養(yǎng)基及基本特性
15種細(xì)胞培養(yǎng)中常用培養(yǎng)基及基本特性
15種細(xì)胞培養(yǎng)中常用培養(yǎng)基及基本特性
關(guān)鍵詞： 細(xì)胞培養(yǎng) 培養(yǎng)基
來源： 互聯(lián)網(wǎng)
6397 閱讀
做實(shí)驗(yàn)、寫文章有問題？快來領(lǐng)取超實(shí)用科研工具箱，實(shí)驗(yàn)、數(shù)據(jù)、寫作一網(wǎng)打盡
限時(shí)免費(fèi)領(lǐng)取
相關(guān)專題
細(xì)胞培養(yǎng)基的配制 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)用品 細(xì)胞培養(yǎng)專題
細(xì)胞培養(yǎng) 中常用培養(yǎng)基及基本特性
1、RPMI-1640 Medium
RPMI-1640廣泛應(yīng)用于哺乳動(dòng)物 、特殊造血細(xì)胞、正?；驉盒栽錾陌准?xì)胞，雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，是目前應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基。主要用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)。其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴細(xì)胞、T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞以及HCT-15上皮細(xì)胞等均可參考使用。
2、Minimum Essential Medium(MEM)
也稱最低必需培養(yǎng)基，它僅含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素。成分簡(jiǎn)單，可廣泛適應(yīng)各種已建成細(xì)胞系和不同地方的哺乳動(dòng)物細(xì)胞類型的培養(yǎng)。MEM-Alpha一般用于培養(yǎng)一些難培養(yǎng)細(xì)胞類型，而其它沒有特殊之處的細(xì)胞株則幾乎均可采用MEM來培養(yǎng)。
3、DMEM-高糖(標(biāo)準(zhǔn)型)是一種應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基，可用于許多哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng),更適合高密度懸浮細(xì)胞培養(yǎng)。適用于附著性較差，但又不希望它脫離原來生長(zhǎng)點(diǎn)的克隆培養(yǎng)，也可用于雜交瘤中骨髓瘤細(xì)胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞的培養(yǎng)。
4、DMEM-低糖(標(biāo)準(zhǔn)型)是一種應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基，可用于許多哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。低糖適于依賴性貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，特別適用于生長(zhǎng)速度快、附著性較差的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)。
5、DMEM/F12
DMEM/F12培養(yǎng)基適于克隆密度的培養(yǎng)。F12培養(yǎng)基成分復(fù)雜，含有多種微量元素，和DMEM以1：1結(jié)合，稱為DMEM/F12培養(yǎng)基(DME/F12medium)，作為開發(fā)無血清配方的基礎(chǔ)，以利用F12含有較豐富的成分和DMEM含有較高濃度的營(yíng)養(yǎng)成分為優(yōu)點(diǎn)。該培養(yǎng)基適用于血清含量較低條件下哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。為了增強(qiáng)該培養(yǎng)基的緩沖能力，改良之一是在DMEM/F12(1：1)中加入15mMHEPES緩沖液。
6、McCoy’s 5A
McCoy’s 5A Medium 主要為肉瘤細(xì)胞的培養(yǎng)所設(shè)計(jì)，可支持多種(如骨髓、皮膚、肺和脾臟等)的原代移植物的生長(zhǎng)，除適于一般的原代細(xì)胞培養(yǎng)外，主要用于作組織活檢培養(yǎng)、一些淋巴細(xì)胞培養(yǎng)以及一些難培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)支持。例如Jensen大鼠肉瘤成纖維細(xì)胞、人淋巴細(xì)胞、HT-29、BHL-100等上皮細(xì)胞。
7、Iscove’s Modified Dulbecco Medium (IMDM)
Guilber 和Iscove將Dulbecco’Medium 改良為 Iscove’s Medium，用于培養(yǎng)紅細(xì)胞和巨噬細(xì)胞前體。此種培養(yǎng)液含有硒、額外的氨基酸和維生素、丙酮酸鈉和HEPES。并用硝酸鉀取代了硝酸鐵。IMDM還能夠促進(jìn)小鼠B淋巴細(xì)胞，LPS刺激的B細(xì)胞，骨髓造血細(xì)胞，T細(xì)胞和淋巴瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。IMDM為營(yíng)養(yǎng)非常豐富的培養(yǎng)液，因此可以用于高密度細(xì)胞的快速增殖培養(yǎng)。
8、M-199 Medium
1950年，Morgan成功研制出具有確定化學(xué)成分的細(xì)胞培養(yǎng)液，即M-199，主要用于雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)。此培養(yǎng)液必須輔以血清才能支持長(zhǎng)期培養(yǎng)。M-199可用于培養(yǎng)多種種屬來源的細(xì)胞，并能培養(yǎng)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。
9、Leibovitz Medium (L-15)
L-15培養(yǎng)液適用于快速增殖瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，用于在CO2缺乏的情況下培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞株。此培養(yǎng)液采用磷酸鹽緩沖體系，氨基酸組成進(jìn)一步改良，并由半乳糖替代了葡萄糖。
10、Ham’s F-10培養(yǎng)基：適應(yīng)小鼠細(xì)胞、人類二倍體的培養(yǎng)。
11、Ham’s F-12培養(yǎng)基：可以在加入很少血清的情況下應(yīng)用，特別適合單細(xì)胞培養(yǎng)和克隆化培養(yǎng)，是無血清培養(yǎng)中常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)液。
12、William’s Medium E：用于大鼠肝上皮細(xì)胞的長(zhǎng)期細(xì)胞培養(yǎng)。
13、MCDB 131 培養(yǎng)液：用于培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞。
14、Opti-MEM I Reduced Serum Media：用于培養(yǎng)造血細(xì)胞。
15、植物血凝素(PHA)：增加細(xì)胞轉(zhuǎn)化和DNA合成。
掃碼關(guān)注「實(shí)驗(yàn)菌」，入科研社群，領(lǐng)學(xué)習(xí)資源
更有優(yōu)質(zhì)直播、研選好物、福利活動(dòng)等你來！
經(jīng)驗(yàn)交流
查看更多??
彩虹伊伊WB9C
你所在的學(xué)校的補(bǔ)助在全國(guó)是什么水平？ 還記得你在讀研時(shí)，所在學(xué)校的補(bǔ)助是多少嗎~？讀博的也可以說說呀。我的好少，有點(diǎn)想哭。 ??101?評(píng)論
彩虹伊伊WB9C
科研汪也想有春天：告訴我你們的另一半都在哪里找的？ 小伙伴們，請(qǐng)問你們的女（男）朋友是怎么找到的？（好給后來的朋友參考?。┦墙挥丫W(wǎng)站，還是七大姑八大姨介紹，還是同學(xué)自然成事？春天到了，我也想擁有一段甜甜的戀愛~看看你們可憐又可愛的小師弟小師妹吧！ ??41?評(píng)論
一粒會(huì)飛的沙
細(xì)胞污染 懸浮細(xì)胞復(fù)蘇后培養(yǎng)2.3天會(huì)出現(xiàn)小黑點(diǎn)，在倒置顯微鏡第四擋可見細(xì)菌在活動(dòng)。采用兩次離心，然后加平時(shí)雙倍量的抗生素，效果不佳。實(shí)驗(yàn)用的東西都重新高壓滅菌了，培養(yǎng)液也重新過濾了，個(gè)人操作也更加注意了，但仍然在復(fù)蘇后出現(xiàn)細(xì)菌，苦惱?。?！ ??35?評(píng)論
提問
感興趣的產(chǎn)品
溫度計(jì)
hif2a抗體
mmp-9
水分測(cè)定儀
熒光光譜儀
dna測(cè)序
立克次體抗體
生物質(zhì)譜
統(tǒng)計(jì)分析服務(wù)
感興趣的廠家
江西中洪博元生物技術(shù)有限公司
蘇州帕諾米克生物科技有限公司
Cytiva（思拓凡）
水分測(cè)定儀廠家
熒光光譜儀廠家
dna測(cè)序廠家
立克次體抗體廠家
生物質(zhì)譜廠家
統(tǒng)計(jì)分析服務(wù)廠家
版權(quán)聲明
本網(wǎng)站所有注明“來源：丁香園”的文字、圖片和音視頻資料，版權(quán)均屬于丁香園所有，非經(jīng)授權(quán)，任何媒體、網(wǎng)站或個(gè)人不得轉(zhuǎn)載，授權(quán)轉(zhuǎn)載時(shí)須注明“來源：丁香園”。本網(wǎng)所有轉(zhuǎn)載文章系出于傳遞更多信息之目的，且明確注明來源和作者，不希望被轉(zhuǎn)載的媒體或個(gè)人可與我們聯(lián)系，我們將立即進(jìn)行刪除處理。
移動(dòng)版： 實(shí)驗(yàn)詳情頁
細(xì)胞培養(yǎng)
43 內(nèi)容 612 訂閱
查看專題
相關(guān)實(shí)驗(yàn)Protocol 更多
細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)加的無血清培養(yǎng)基里含有生長(zhǎng)因子嗎？
MDCK 細(xì)胞培養(yǎng)
三維細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)——清洗、消毒
細(xì)胞計(jì)數(shù)方法
MTT實(shí)驗(yàn)最全指南
ROS的檢測(cè)方法
Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)總結(jié)之操作步驟
推薦閱讀 更多
細(xì)胞培養(yǎng)基本步驟
四種酵母培養(yǎng)基的配方與操作步驟
PDA培養(yǎng)基的配制
細(xì)胞培養(yǎng)過程中有哪些污染
LB培養(yǎng)基的配制
細(xì)胞培養(yǎng)中的污染
我的詢價(jià)
詢價(jià)列表
點(diǎn)擊加載更多
暫時(shí)沒有已詢價(jià)產(chǎn)品
發(fā)送產(chǎn)品
手機(jī)驗(yàn)證
快捷詢價(jià) 發(fā)送名片
讓更多商家聯(lián)系我
當(dāng)你希望讓更多商家聯(lián)系你時(shí)，可以勾選后發(fā)送詢價(jià)，平臺(tái)會(huì)將你的詢價(jià)消息推薦給更多商家。
發(fā)送
提問
用戶服務(wù)
意見反饋
合作咨詢
關(guān)于丁香通
產(chǎn)品庫
最新產(chǎn)品列表
丁香實(shí)驗(yàn)
用戶服務(wù)中心
試用中心
丁香通新浪微博
公司信息
關(guān)于我們
聯(lián)系我們
友情鏈接
法律聲明
網(wǎng)站導(dǎo)航
加盟丁香園
我是買家
求購(gòu)商品
品牌專區(qū)
品牌學(xué)堂
促銷專區(qū)
我是賣家
服務(wù)報(bào)價(jià)
廣告媒體
客戶說明
廣告規(guī)則
企業(yè)合作
無憂采購(gòu) 輕松科研
科研好物關(guān)注研選號(hào)
意見反饋
如何選擇合適的細(xì)胞培養(yǎng)基？ - 知乎
如何選擇合適的細(xì)胞培養(yǎng)基？ - 知乎首頁知乎知學(xué)堂發(fā)現(xiàn)等你來答?切換模式登錄/注冊(cè)細(xì)胞細(xì)胞生物學(xué)微生物培養(yǎng)基如何選擇合適的細(xì)胞培養(yǎng)基？關(guān)注者11被瀏覽23,617關(guān)注問題?寫回答?邀請(qǐng)回答?好問題?添加評(píng)論?分享?10 個(gè)回答默認(rèn)排序醫(yī)學(xué)科研小坑?山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 遺傳學(xué)碩士? 關(guān)注關(guān)注公眾號(hào)“醫(yī)學(xué)科研小坑”，了解更多相關(guān)科研技術(shù)內(nèi)容！實(shí)驗(yàn)室新來了一個(gè)師弟，老板讓其從養(yǎng)細(xì)胞開始。這個(gè)小師弟是個(gè)夜貓子，總喜歡深夜做實(shí)驗(yàn)。一天早上：小師弟：濕胸，昨天傳的細(xì)胞沒貼壁，培養(yǎng)液變成紫紅色的了。是不是你給我的那皿細(xì)胞是不好的？科研狗：你操作沒毛??？小師弟：絕對(duì)沒毛病，嚴(yán)格遵循你的指示。為了怕孵箱細(xì)胞太多，我特意單獨(dú)放在另外一個(gè)孵箱里?？蒲泄罚旱鹊?，另外一個(gè)孵箱？沒有接通CO2啊今天我們來聊一聊培養(yǎng)液中的顏色，一般情況下，我們購(gòu)買回來的DMEM培養(yǎng)基都是鮮紅色的，如下圖：但是，作為老司機(jī)的你肯定也見過如下顏色的：還有這樣顏色的：小師弟：師兄，你見過赤橙黃露青藍(lán)紫的嗎？科研狗：...1. 為什么這個(gè)DMEM培養(yǎng)基是鮮紅色的？這個(gè)問題可以從如下兩個(gè)方面來回答：業(yè)余回答：A 它總要有一個(gè)顏色吧，如果是綠色的或者你會(huì)問他為什么是綠色的B 紅色的看上去有食欲，細(xì)胞自然喜歡吃了。你想想，給你一堆綠了吧唧的水果和給你一堆鮮紅的水果，你喜歡吃哪一種？專業(yè)回答：培養(yǎng)基的顏色主要是酚紅來顯示的，酚紅指示顏色非常靈敏，p值范圍為6-8，顏色由黃變?yōu)樽霞t。酚紅不是必須的，在有些情況下甚至是多余的，酚紅有類似固醇類激素的作用，如果涉及到固醇類激素相關(guān)的細(xì)胞培養(yǎng)，最好不要添加。但是為了培養(yǎng)方便，能讓我們直觀地感覺培養(yǎng)液的狀況，加入酚紅后，如果培養(yǎng)液偏酸了，就顯示偏黃色，偏堿性了就顯示偏紫色。2. 為什么培養(yǎng)皿放在一個(gè)沒有開啟CO2的孵箱里面，培養(yǎng)液顏色偏紫色？一般的DMEM使用的緩沖體系是NaHCO3， 初中的時(shí)候應(yīng)該見過如下的方程2NaHCO3=Na2CO3+CO2+H2O在沒有CO2的孵箱中，培養(yǎng)液中的CO2一直溢出，碳酸變少了，溶液變堿性了，就偏紫色了。同時(shí)我們打開了很久的DMEM瓶里面的培養(yǎng)液也會(huì)慢慢偏紫色，也就是這個(gè)道理。 3. 什么時(shí)候溶液會(huì)變?yōu)辄S色？這個(gè)簡(jiǎn)單，一般污染細(xì)菌的時(shí)候或者長(zhǎng)時(shí)間不換液，溶液變?yōu)辄S色主要是酸性物質(zhì)太多，細(xì)菌和細(xì)胞過度增長(zhǎng)都會(huì)產(chǎn)生酸性物質(zhì)，溶液會(huì)變?yōu)辄S色。4. 培養(yǎng)基偏紫色了還能用不？可以將該偏紫色的培養(yǎng)基置于CO2孵箱中，擰松瓶蓋。一段時(shí)間之后你會(huì)發(fā)現(xiàn)顏色變?yōu)轷r紅色了，那么可以繼續(xù)接著用。但是不要使用過長(zhǎng)時(shí)間未用完并且變色的培養(yǎng)液，置于空氣下氧化之后培養(yǎng)基成分可能已發(fā)生了變化。5. 哪些情況下不得使用酚紅？如前面所說的酚紅有類似固醇類激素的作用，如果涉及到固醇類激素相關(guān)的細(xì)胞培養(yǎng)，不要添加。另外在做流式細(xì)胞的時(shí)候，酚紅會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響，因此也不要添加。6. 有沒有不受CO2影響的培養(yǎng)基？有，如果緩沖體系不是NaHCO3，而是其他體系如HEPES，就不受CO2的影響。7. 常用的培養(yǎng)基有哪些？MEM（Minimum Essential Medium）: 也稱最低必須培養(yǎng)基，它僅含有12種必須氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素?？梢詮V泛應(yīng)用到各種細(xì)胞培養(yǎng)。DMEM：分為高糖和低糖，碳酸氫鈉緩沖體系，所以需要CO2。高糖的適合于高密度懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，適用于附著性較差，但又不希望它脫離原來生長(zhǎng)點(diǎn)的細(xì)胞。低糖的適合于生長(zhǎng)速度較快，附著性較差的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)。DMEM/F12：F12 培養(yǎng)基成分復(fù)雜，含有多種微量元素，和DMEM以1：1結(jié)合，稱為DMEM/F12培養(yǎng)基（DME/F12medium），作為開發(fā)無血清配方的基礎(chǔ)，以利用F12含有較豐富成分和DMEM含有較高濃度的營(yíng)養(yǎng)成分為優(yōu)點(diǎn)。該培養(yǎng)基適用于血清含量較條件下哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。RPMI-1640：主要用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，廣泛用于哺乳物，特殊造血細(xì)胞，正?；蛘邜盒栽錾陌准?xì)胞，雜交瘤細(xì)胞。另外K-562， L-60、urkat、IM-9 等淋巴細(xì)胞、T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞也可以使用。McCoy’s 5A : 主要用于肉瘤細(xì)胞的培養(yǎng)， 還可以用于骨髓、皮膚、肺等原代培養(yǎng)，用于作組織活檢培養(yǎng)、一些淋巴細(xì)胞培養(yǎng)以及一些難培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)支持。比如HT29，BHL100等上皮細(xì)胞。IMDM（Iscove’s Modified Dulbecco Medium）：主要用于紅細(xì)胞和巨噬細(xì)胞前體培養(yǎng)。培養(yǎng)液中含有微量元素硒以及額外的氨基酸和維生素、丙酮酸鈉以及HEPES。M199 Medium 是具有確定化學(xué)成分的細(xì)胞培養(yǎng)液，主要用于雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)必須輔助血清才能長(zhǎng)期培養(yǎng)。L-15(Leibovitz Medium) 適用于在CO2缺乏的情況下培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞株，用于快速增值瘤細(xì)胞的培養(yǎng)。Ham’s F-10: 適用于小鼠細(xì)胞以及人的二倍體細(xì)胞的培養(yǎng)Ham’s F-12: 適用于單細(xì)胞培養(yǎng)或者克隆培養(yǎng)， 是無血清培養(yǎng)基中常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。MCDB131：適用于培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞。Opti-MEM I Reduced Serum Media: 適用于培養(yǎng)造血細(xì)胞。本文轉(zhuǎn)自科研狗發(fā)布于 2022-08-27 22:17?贊同 7??添加評(píng)論?分享?收藏?喜歡收起?普諾賽生物? 關(guān)注細(xì)胞培養(yǎng)基既是培養(yǎng)細(xì)胞中供給細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞生殖增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。本期為大家整理了常見的細(xì)胞培養(yǎng)基種類，接下來我們一起來了解一下這些培養(yǎng)基和適用的細(xì)胞類型及選擇方法。一、常見的細(xì)胞培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基（MM）基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)鹽和其它一些輔助物質(zhì)。合成培養(yǎng)基使用時(shí)還需添加一定量的血清使細(xì)胞保持良好的生長(zhǎng)狀態(tài)。培養(yǎng)基的種類有很多，其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12是應(yīng)用較為廣泛的。其他如M199、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于某些細(xì)胞的培養(yǎng)。具體的特征及應(yīng)用如下：培養(yǎng)基特征應(yīng)用BME細(xì)胞培養(yǎng)基1955年Eagle設(shè)計(jì)，以BSS為基礎(chǔ)，添加8種維生素，13種氨基酸，成分簡(jiǎn)單、便于添加適于各種細(xì)胞系和特殊研究用，在此基礎(chǔ)上改良的細(xì)胞培養(yǎng)基品種有MEM、DMEM、IMDM等MEM細(xì)胞培養(yǎng)基由Harry Eagle在Eagle基本培養(yǎng)基（BEM）的基礎(chǔ)上發(fā)展而來的。MEM培養(yǎng)基僅含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素，成分簡(jiǎn)單，主要用于貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)，1959年修改配方，刪去賴氨酸、生物素，增加氨基酸濃度，配方修改后也可用于其他類型細(xì)胞培養(yǎng)適合多種細(xì)胞單層生長(zhǎng)，是一種最基本、適用范圍最廣的培養(yǎng)基。因其營(yíng)養(yǎng)成分所限，針對(duì)生產(chǎn)之特定細(xì)胞培養(yǎng)與表達(dá)時(shí)，并不一定是使用效果最佳或者最經(jīng)濟(jì)的培養(yǎng)基。此外，MEM細(xì)胞培養(yǎng)基有含Earle's平衡鹽的類型，也有含Hanks'平衡鹽的類型；有高壓滅菌型的，也有過濾除菌型的；還有含非必需氨基酸的類型。應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況注意選擇合適的 MEM 細(xì)胞培養(yǎng)基M199細(xì)胞培養(yǎng)基1950 年由 Morgan 等設(shè)計(jì)，除 BSS 外，含有53 種成分添加適量的血清后，可廣泛用于多種細(xì)胞培養(yǎng)，可用于病毒學(xué)、疫苗生產(chǎn)以及大鼠胰腺上皮細(xì)胞和小鼠晶狀體組織的培養(yǎng)DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基由Dulbecco改良的 Eagle 培養(yǎng)基，DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍，維生素濃度是MEM的4倍，同時(shí)還增加了非必須氨基酸、微量鐵離子以及丙酮酸鈉。分低糖型（1000mg/L）、高糖型（4500mg/L）常用于雜交瘤的骨髓瘤細(xì)胞和 DNA 轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)。例如 CHO 細(xì)胞表達(dá)生產(chǎn)乙肝疫苗、CHO 細(xì)胞表達(dá)EPOIMDM細(xì)胞培養(yǎng)基由Iscove's改良的Eagle培養(yǎng)基，IMDM培養(yǎng)基在DMEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加了硒、HEPES、丙酮酸鈉以及額外的氨基酸和維生素，營(yíng)養(yǎng)非常豐富可用于雜交瘤細(xì)胞和高密度細(xì)胞的快速培養(yǎng)RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制，針對(duì)淋巴細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)計(jì)，BSS＋21種氨基酸＋維生素11種等成分廣泛應(yīng)用于各種正常細(xì)胞和癌細(xì)胞的培養(yǎng)，尤其是懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)Ham's F10、F12細(xì)胞培養(yǎng)基1963年、1969年由Ham設(shè)計(jì)，含微量元素，Ham's F-12以Ham's F-10營(yíng)養(yǎng)混合物為基礎(chǔ)設(shè)計(jì)而成的，可在血清含量低時(shí)用F10適用于倉鼠、人二倍體細(xì)胞，F(xiàn)12適用于CHO細(xì)胞。在低血清含量下時(shí)，特別適合單細(xì)胞培養(yǎng)和克隆化培養(yǎng)，添加血清后也廣泛應(yīng)用于癌細(xì)胞和原代細(xì)胞的培養(yǎng)，如大鼠肝細(xì)胞、大鼠前列腺上皮細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、大鼠成肌細(xì)胞、雞胚胎細(xì)胞等DMEM/F12細(xì)胞培養(yǎng)基在DMEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加F12培養(yǎng)基中更為豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，含有多種微量元素廣泛應(yīng)用于多種哺乳類細(xì)胞的培養(yǎng)。同時(shí)，常作為開發(fā)無血清培養(yǎng)基的基礎(chǔ)，也適用于低血清含量下哺乳動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)以及克隆密度培養(yǎng)McCoy's 5A培養(yǎng)基Thomas McCoy等人在1959年設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基，最初專門用于Novikoff Hepatoma細(xì)胞的培養(yǎng)。McCoy's 5A培養(yǎng)基是改良的Basal Medium 5A，與其他培養(yǎng)基不同的是，McCoy's 5A含有還原型谷胱甘肽、細(xì)菌蛋白胨以及高濃度的葡萄糖McCoy's 5A廣泛用于多種類型的原代細(xì)胞的培養(yǎng)，如骨髓、皮膚、牙齦、腎、脾、肺、大鼠胚胎、網(wǎng)膜等。此外McCoy's 5A培養(yǎng)基還用于組織活檢培養(yǎng)、細(xì)胞建系，以及一些淋巴細(xì)胞和較難培養(yǎng)的細(xì)胞的培養(yǎng)L15細(xì)胞培養(yǎng)基L-15培養(yǎng)基的緩沖系統(tǒng)由磷酸鹽和游離堿基氨基酸組成，代替了傳統(tǒng)的碳酸氫鈉緩沖系統(tǒng)，同時(shí)，用半乳糖和丙酮酸鈉代替葡萄糖可以防止酸性代謝副產(chǎn)物的形成，有助于維持培養(yǎng)液PH的穩(wěn)定，適合用于非CO2平衡環(huán)境的細(xì)胞培養(yǎng)L-15培養(yǎng)基適用于猴腎細(xì)胞和HEP-2的培養(yǎng)、原代（如胚胎和成人組織）細(xì)胞分離、多種病毒的培養(yǎng)以及神經(jīng)元的培養(yǎng)等完全培養(yǎng)基（CM）完全培養(yǎng)基是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加了血清、抗生素等物質(zhì)，也叫（血清）細(xì)胞培養(yǎng)基。其中大部分細(xì)胞培養(yǎng)常用的是牛血清，因?yàn)榕Ｑ逯泻写龠M(jìn)細(xì)胞增殖的各種生長(zhǎng)因子。此外為防止污染，培養(yǎng)液中尚需加一定量的抗生素。完全培養(yǎng)基根據(jù)添加血清量的多少，可分為細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基和細(xì)胞維持培養(yǎng)基，用于不同細(xì)胞和不同研究。無血清細(xì)胞培養(yǎng)基（SFM）無血清培養(yǎng)基是指在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上引入成分完全明確或部分明確的血清替代成分，主要是由基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加物（替代血清的補(bǔ)充因子）組成。其主要成分為下列幾種：黏附因子約有80%的細(xì)胞是屬于貼附型生長(zhǎng)。一般的細(xì)胞培養(yǎng)基是利用血清作為其來源，在無血清培養(yǎng)基中，細(xì)胞黏附因子就是很重要的物質(zhì)。生長(zhǎng)因子生長(zhǎng)因子是維持細(xì)胞活性與促進(jìn)細(xì)胞增生、遷移、分化等，不可或缺的要素。酶抑制劑貼附型細(xì)胞一般多以胰蛋白酶（trypsin）進(jìn)行傳代。在一般細(xì)胞培養(yǎng)中，血清中含有抑制trypsin的成分，所以無血清培養(yǎng)基必須添加trypsin抑制劑。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)之前，要留有種子細(xì)胞，種子細(xì)胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中，以保證細(xì)胞的特性不發(fā)生變化。優(yōu)點(diǎn)：01 未知組分少；02 避免血清對(duì)細(xì)胞的毒性作用和血清源性污染；03 雜蛋白含量少，避免血清成分影響研究結(jié)果或是產(chǎn)品制程，提高產(chǎn)品表達(dá)水平并易于純化。缺點(diǎn)：01 無血清培養(yǎng)基成本較高；02 不是所有的細(xì)胞都能在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)；03 細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中易受某些機(jī)械因素和化學(xué)因素的影響，培養(yǎng)基保存和應(yīng)用方面局限性很大。二、細(xì)胞培養(yǎng)基的選擇細(xì)胞培養(yǎng)基的種類很多，如何選擇適宜的培養(yǎng)基是細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵。在此提供以下建議可供參考：01 如果是新購(gòu)買的細(xì)胞，可以向細(xì)胞株的廠家咨詢，或者詢問引種來源查找細(xì)胞庫上對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)基；02 根據(jù)細(xì)胞的特點(diǎn)及實(shí)驗(yàn)的需要來選擇培養(yǎng)基；03 自己試驗(yàn)，用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，做生長(zhǎng)曲線，記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)速度，觀察細(xì)胞的形態(tài)變化，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇最佳培養(yǎng)基。培養(yǎng)基種類和細(xì)胞系并不是一個(gè)強(qiáng)制的對(duì)應(yīng)關(guān)系。具體培養(yǎng)細(xì)胞使用什么培養(yǎng)基，主要還是根據(jù)數(shù)據(jù)庫、文獻(xiàn)和經(jīng)驗(yàn)哦！發(fā)布于 2023-12-12 14:54?贊同 2??添加評(píng)論?分享?收藏?喜歡
細(xì)胞培養(yǎng)基的種類有哪些？ - 知乎
細(xì)胞培養(yǎng)基的種類有哪些？ - 知乎首頁知乎知學(xué)堂發(fā)現(xiàn)等你來答?切換模式登錄/注冊(cè)細(xì)胞細(xì)胞生物學(xué)微生物培養(yǎng)基細(xì)胞培養(yǎng)基的種類有哪些？關(guān)注者9被瀏覽5,031關(guān)注問題?寫回答?邀請(qǐng)回答?好問題?添加評(píng)論?分享?6 個(gè)回答默認(rèn)排序Dr.Whale??Texas A&M University PhD? 關(guān)注經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種，其中 DMEM、 RPMI 1640、 MEM 、 DMEM/F12 都是應(yīng)用最廣泛的培養(yǎng)基。其具體的特征及應(yīng)用如下：1）BME細(xì)胞培養(yǎng)基基礎(chǔ)Eagle培養(yǎng)基，BSS＋12種氨基酸＋谷氨酰胺＋8種維生素。簡(jiǎn)單、便于添加，適于各種傳代細(xì)胞系和特殊研究用。2）MEM細(xì)胞培養(yǎng)基又稱低限量Eagle培養(yǎng)基，在Eagle's基礎(chǔ)培養(yǎng)基（BME）上修改而來，刪去賴氨酸、生物素，氨基酸濃度增加，適合多種細(xì)胞單層生長(zhǎng)，有可高壓滅菌品種，是一種最基本、試用范圍最廣的培養(yǎng)基。3）DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基分為低糖和高糖兩種。低糖適用于依賴性貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，特別適用于生長(zhǎng)速度快、附著性較差的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)。高糖更適合高密度懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，也適用于附著性較差，但又不希望它脫離原來生長(zhǎng)點(diǎn)的克隆培養(yǎng)，也可用于雜交瘤中骨髓瘤細(xì)胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞的培養(yǎng)。例如CHO細(xì)胞表達(dá)生產(chǎn)乙肝疫苗、CHO細(xì)胞表達(dá)EPO。4）IMDM細(xì)胞培養(yǎng)基用于培養(yǎng)紅細(xì)胞和巨噬細(xì)胞前體。IMDM還能夠促進(jìn)小鼠B淋巴細(xì)胞，LPS刺激的B細(xì)胞，骨髓造血細(xì)胞，T細(xì)胞和淋巴瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。5）RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基針對(duì)淋巴細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)計(jì)，含BSS＋21種氨基酸＋維生素11種等?，F(xiàn)也用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，如哺乳動(dòng)物、特殊造血細(xì)胞、正常或惡性增生的白細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)。6）HamF10細(xì)胞培養(yǎng)基1963年Ham設(shè)計(jì)，含微量元素，可在血清含量低時(shí)用，適用于克隆化培養(yǎng)。F10適用于倉鼠、人二倍體細(xì)胞，特適于羊水細(xì)胞培養(yǎng)。7）DMEM/F12細(xì)胞培養(yǎng)基Ham's F12是為在低血清濃度下克隆CHO細(xì)胞而設(shè)計(jì)的，現(xiàn)在也廣泛應(yīng)用于克隆形成率的分析及原代培養(yǎng)。8）M199細(xì)胞培養(yǎng)基M-199可用于培養(yǎng)多種種屬來源的細(xì)胞，并能培養(yǎng)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。現(xiàn)廣泛用于病毒學(xué)、疫苗生產(chǎn)。9）McCoy5A培養(yǎng)基MeCoy為肉瘤細(xì)胞設(shè)計(jì)，現(xiàn)可支持多種（如骨髓、皮膚、肺和脾臟等）的原代移植物的生長(zhǎng)。10）L15 細(xì)胞培養(yǎng)基L-15培養(yǎng)液適用于快速增殖瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，用于在CO2缺乏的情況下培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞株。此培養(yǎng)液采用磷酸鹽緩沖體系，氨基酸組成進(jìn)一步改良，并由半乳糖替代了葡萄糖。發(fā)布于 2022-06-22 15:42?贊同 3??添加評(píng)論?分享?收藏?喜歡收起?蘇州阿爾法生物?蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司 網(wǎng)絡(luò)推廣? 關(guān)注嘿，小伙伴，HEK293細(xì)胞咋養(yǎng)?。坑蒙杜囵B(yǎng)基呀？哈哈，這個(gè)簡(jiǎn)單，毋庸置疑地告訴你，DMEM和RPMI都行啊！ HEK293細(xì)胞是廣泛應(yīng)用于科研領(lǐng)域的一種細(xì)胞模型，當(dāng)然要注意選用適合它們的培養(yǎng)基啦。妥妥地，你得選擇營(yíng)養(yǎng)豐富、含有充足生長(zhǎng)因子和營(yíng)養(yǎng)成分的培養(yǎng)基啊。DMEM和RPMI這兩個(gè)培養(yǎng)基都含有足夠的碳水化合物、氨基酸和維生素，供給細(xì)胞所需的能量和材料，保證細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖。HEK293細(xì)胞 這兩種培養(yǎng)基各有千秋??！DMEM培養(yǎng)基一般用于腫瘤細(xì)胞和無血清培養(yǎng)；而RPMI培養(yǎng)基則多用在白血細(xì)胞培養(yǎng)和腫瘤細(xì)胞等黏附生長(zhǎng)條件下的培養(yǎng)。 當(dāng)然，你也可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求自己調(diào)制培養(yǎng)基哦。前提是要先知道HEK293細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)需求和培養(yǎng)條件，然后選擇合適的營(yíng)養(yǎng)成分和濃度以及添加生長(zhǎng)因子來制備培養(yǎng)基。自己調(diào)制培養(yǎng)基一方面可以節(jié)約成本，另一方面也可以盡量滿足實(shí)驗(yàn)要求，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。 呀，童鞋們一定要注意培養(yǎng)基的配方和不同廠家之間的區(qū)別哦！前期試驗(yàn)時(shí)盡量先做一些小試驗(yàn)，評(píng)估培養(yǎng)基對(duì)HEK293細(xì)胞的影響，再在大規(guī)模培養(yǎng)時(shí)使用哦。同時(shí)也要關(guān)注HEK293細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)和生理特點(diǎn)，及時(shí)調(diào)整培養(yǎng)基的配方和濃度，保證細(xì)胞的健康生長(zhǎng)。 總之，選對(duì)培養(yǎng)基對(duì)于HEK293細(xì)胞的生長(zhǎng)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果至關(guān)重要！ 聽說你在尋找KEK293細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)基？別擔(dān)心，讓我們幫您解決這一煩惱吧！蘇州阿爾法生物除了有500多種腫瘤細(xì)胞，200多種基因編輯細(xì)胞外，還有細(xì)胞培養(yǎng)試劑、細(xì)胞培養(yǎng)耗材、實(shí)驗(yàn)耗材和 實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備采購(gòu)。發(fā)布于 2023-05-10 14:26?贊同??添加評(píng)論?分享?收藏?喜歡
細(xì)胞學(xué)堂 | 細(xì)胞培養(yǎng)基的種類以及如何選擇 - 武漢普諾賽生命科技有限公司 - 您身邊的細(xì)胞專家【官方網(wǎng)站】
細(xì)胞學(xué)堂 | 細(xì)胞培養(yǎng)基的種類以及如何選擇 - 武漢普諾賽生命科技有限公司 - 您身邊的細(xì)胞專家【官方網(wǎng)站】
本司產(chǎn)品僅用于科研，不用于臨床診斷和治療
全國(guó)免費(fèi)熱線：400-999-2100
您身邊的細(xì)胞培養(yǎng)專家！
所有分類
所有分類 細(xì)胞系 原代細(xì)胞 血清 細(xì)胞培養(yǎng)基 輔助試劑 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 細(xì)胞房除菌產(chǎn)品
熱搜：
胎牛血清
|VERO
|RAW264.7
|成纖維細(xì)胞
|間充質(zhì)干細(xì)胞
|上皮細(xì)胞
首頁
產(chǎn)品中心
特色產(chǎn)品 血清細(xì)胞房除菌系列產(chǎn)品
細(xì)胞資源庫 細(xì)胞系原代細(xì)胞免疫細(xì)胞及干細(xì)胞
細(xì)胞培養(yǎng)基 完全培養(yǎng)基常規(guī)基礎(chǔ)培養(yǎng)基無血清培養(yǎng)基細(xì)胞粉末培養(yǎng)基特殊定制基礎(chǔ)培養(yǎng)基試劑定制服務(wù)
輔助試劑 平衡鹽溶液和緩沖液細(xì)胞因子細(xì)胞解離試劑抗生素細(xì)胞凍存液“黑膠蟲”清除培養(yǎng)基“支原體”清除培養(yǎng)基生長(zhǎng)添加劑其它試劑
細(xì)胞功能檢測(cè)試劑盒 Annexin V凋亡檢測(cè)試劑盒TUNEL凋亡檢測(cè)試劑盒Caspase凋亡檢測(cè)試劑盒JC-1凋亡檢測(cè)試劑盒細(xì)胞增殖/活力/毒性檢測(cè)試劑盒細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒
細(xì)胞鑒定服務(wù)
人源細(xì)胞STR鑒定
小鼠細(xì)胞STR鑒定
種屬鑒定
技術(shù)支持
技術(shù)資料
常見問題
細(xì)胞信息查詢
實(shí)驗(yàn)技術(shù)視頻
實(shí)驗(yàn)指南
文獻(xiàn)應(yīng)用
關(guān)于我們
公司簡(jiǎn)介
人才招聘
聯(lián)系我們
新聞動(dòng)態(tài)
售后服務(wù)
促銷活動(dòng)
在線留言
賬號(hào)登錄
郵箱注冊(cè)
忘記密碼？
>>賬號(hào)激活
登????錄
其他賬號(hào)登錄: ???
*個(gè)人郵箱：
*設(shè)置密碼：
*確認(rèn)密碼：
同意協(xié)議并注冊(cè)
忘記密碼
個(gè)人郵箱：
驗(yàn)證碼：
提交
賬號(hào)激活
個(gè)人郵箱：
激活
×
當(dāng)前位置：首頁?>>?技術(shù)支持?>>?實(shí)驗(yàn)指南 >> 詳細(xì)內(nèi)容
技術(shù)支持Technical Support
技術(shù)資料常見問題細(xì)胞信息查詢實(shí)驗(yàn)技術(shù)視頻實(shí)驗(yàn)指南文獻(xiàn)應(yīng)用
聯(lián)系我們CONTACT US
400-999-210024小時(shí)服務(wù)熱線
sales@procell.com.cn銷售郵箱
細(xì)胞學(xué)堂 | 細(xì)胞培養(yǎng)基的種類以及如何選擇
來源：Pricella 瀏覽量： 發(fā)布時(shí)間：2023-06-20 10:14:24
? 一??常見的細(xì)胞培養(yǎng)基細(xì)胞培養(yǎng)基既是培養(yǎng)細(xì)胞中供給細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞生殖增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。基礎(chǔ)培養(yǎng)基（MM）基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)鹽和其它一些輔助物質(zhì)。合成培養(yǎng)基使用時(shí)還需添加一定量的血清使細(xì)胞保持良好的生長(zhǎng)狀態(tài)。培養(yǎng)基的種類有很多，其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12是應(yīng)用較為廣泛的。其他如M199、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于某些細(xì)胞的培養(yǎng)。具體的特征及應(yīng)用如下：向上滑動(dòng)閱覽培養(yǎng)基特征應(yīng)用BME細(xì)胞培養(yǎng)基1955年Eagle設(shè)計(jì)，以BSS為基礎(chǔ)，添加8種維生素，13種氨基酸，成分簡(jiǎn)單、便于添加適于各種細(xì)胞系和特殊研究用，在此基礎(chǔ)上改良的細(xì)胞培養(yǎng)基品種有MEM、DMEM、IMDM等MEM細(xì)胞培養(yǎng)基由Harry Eagle在Eagle基本培養(yǎng)基（BEM）的基礎(chǔ)上發(fā)展而來的。MEM培養(yǎng)基僅含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素，成分簡(jiǎn)單，主要用于貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)，1959年修改配方，刪去賴氨酸、生物素，增加氨基酸濃度，配方修改后也可用于其他類型細(xì)胞培養(yǎng)適合多種細(xì)胞單層生長(zhǎng)，是一種最基本、適用范圍最廣的培養(yǎng)基。因其營(yíng)養(yǎng)成分所限，針對(duì)生產(chǎn)之特定細(xì)胞培養(yǎng)與表達(dá)時(shí)，并不一定是使用效果最佳或者最經(jīng)濟(jì)的培養(yǎng)基。此外，MEM細(xì)胞培養(yǎng)基有含Earle's平衡鹽的類型，也有含Hanks'平衡鹽的類型；有高壓滅菌型的，也有過濾除菌型的；還有含非必需氨基酸的類型。應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況注意選擇合適的 MEM 細(xì)胞培養(yǎng)基M199細(xì)胞培養(yǎng)基1950 年由 Morgan 等設(shè)計(jì)，除 BSS 外，含有53 種成分添加適量的血清后，可廣泛用于多種細(xì)胞培養(yǎng)，可用于病毒學(xué)、疫苗生產(chǎn)以及大鼠胰腺上皮細(xì)胞和小鼠晶狀體組織的培養(yǎng)DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基由Dulbecco改良的 Eagle 培養(yǎng)基，DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍，維生素濃度是MEM的4倍，同時(shí)還增加了非必須氨基酸、微量鐵離子以及丙酮酸鈉。分低糖型（1000mg/L）、高糖型（4500mg/L）常用于雜交瘤的骨髓瘤細(xì)胞和 DNA 轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)。例如 CHO 細(xì)胞表達(dá)生產(chǎn)乙肝疫苗、CHO 細(xì)胞表達(dá)EPOIMDM細(xì)胞培養(yǎng)基由Iscove's改良的Eagle培養(yǎng)基，IMDM培養(yǎng)基在DMEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加了硒、HEPES、丙酮酸鈉以及額外的氨基酸和維生素，營(yíng)養(yǎng)非常豐富可用于雜交瘤細(xì)胞和高密度細(xì)胞的快速培養(yǎng)RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制，針對(duì)淋巴細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)計(jì)，BSS＋21種氨基酸＋維生素11種等成分廣泛應(yīng)用于各種正常細(xì)胞和癌細(xì)胞的培養(yǎng)，尤其是懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)Ham's F10、F12細(xì)胞培養(yǎng)基1963年、1969年由Ham設(shè)計(jì)，含微量元素，Ham's F-12以Ham's F-10營(yíng)養(yǎng)混合物為基礎(chǔ)設(shè)計(jì)而成的，可在血清含量低時(shí)用F10適用于倉鼠、人二倍體細(xì)胞，F(xiàn)12適用于CHO細(xì)胞。在低血清含量下時(shí)，特別適合單細(xì)胞培養(yǎng)和克隆化培養(yǎng)，添加血清后也廣泛應(yīng)用于癌細(xì)胞和原代細(xì)胞的培養(yǎng)，如大鼠肝細(xì)胞、大鼠前列腺上皮細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、大鼠成肌細(xì)胞、雞胚胎細(xì)胞等DMEM/F12細(xì)胞培養(yǎng)基在DMEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加F12培養(yǎng)基中更為豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，含有多種微量元素廣泛應(yīng)用于多種哺乳類細(xì)胞的培養(yǎng)。同時(shí)，常作為開發(fā)無血清培養(yǎng)基的基礎(chǔ)，也適用于低血清含量下哺乳動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)以及克隆密度培養(yǎng)McCoy's 5A培養(yǎng)基Thomas McCoy等人在1959年設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基，最初專門用于Novikoff Hepatoma細(xì)胞的培養(yǎng)。McCoy's 5A培養(yǎng)基是改良的Basal Medium 5A，與其他培養(yǎng)基不同的是，McCoy's 5A含有還原型谷胱甘肽、細(xì)菌蛋白胨以及高濃度的葡萄糖McCoy's 5A廣泛用于多種類型的原代細(xì)胞的培養(yǎng)，如骨髓、皮膚、牙齦、腎、脾、肺、大鼠胚胎、網(wǎng)膜等。此外McCoy's 5A培養(yǎng)基還用于組織活檢培養(yǎng)、細(xì)胞建系，以及一些淋巴細(xì)胞和較難培養(yǎng)的細(xì)胞的培養(yǎng)L15細(xì)胞培養(yǎng)基L-15培養(yǎng)基的緩沖系統(tǒng)由磷酸鹽和游離堿基氨基酸組成，代替了傳統(tǒng)的碳酸氫鈉緩沖系統(tǒng)，同時(shí)，用半乳糖和丙酮酸鈉代替葡萄糖可以防止酸性代謝副產(chǎn)物的形成，有助于維持培養(yǎng)液PH的穩(wěn)定，適合用于非CO2平衡環(huán)境的細(xì)胞培養(yǎng)L-15培養(yǎng)基適用于猴腎細(xì)胞和HEP-2的培養(yǎng)、原代（如胚胎和成人組織）細(xì)胞分離、多種病毒的培養(yǎng)以及神經(jīng)元的培養(yǎng)等完全培養(yǎng)基（CM）完全培養(yǎng)基是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加了血清、抗生素等物質(zhì)，也叫（血清）細(xì)胞培養(yǎng)基。其中大部分細(xì)胞培養(yǎng)常用的是牛血清，因?yàn)榕Ｑ逯泻写龠M(jìn)細(xì)胞增殖的各種生長(zhǎng)因子。此外為防止污染，培養(yǎng)液中尚需加一定量的抗生素。完全培養(yǎng)基根據(jù)添加血清量的多少，可分為細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基和細(xì)胞維持培養(yǎng)基，用于不同細(xì)胞和不同研究。無血清細(xì)胞培養(yǎng)基（SFM）無血清培養(yǎng)基是指在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上引入成分完全明確或部分明確的血清替代成分，主要是由基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加物（替代血清的補(bǔ)充因子）組成。其主要成分為下列幾種：黏附因子約有80%的細(xì)胞是屬于貼附型生長(zhǎng)。一般的細(xì)胞培養(yǎng)基是利用血清作為其來源，在無血清培養(yǎng)基中，細(xì)胞黏附因子就是很重要的物質(zhì)。生長(zhǎng)因子生長(zhǎng)因子是維持細(xì)胞活性與促進(jìn)細(xì)胞增生、遷移、分化等，不可或缺的要素。酶抑制劑貼附型細(xì)胞一般多以胰蛋白酶（trypsin）進(jìn)行傳代。在一般細(xì)胞培養(yǎng)中，血清中含有抑制trypsin的成分，所以無血清培養(yǎng)基必須添加trypsin抑制劑。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)之前，要留有種子細(xì)胞，種子細(xì)胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中，以保證細(xì)胞的特性不發(fā)生變化。優(yōu)點(diǎn)1未知組分少；2避免血清對(duì)細(xì)胞的毒性作用和血清源性污染；3雜蛋白含量少，避免血清成分影響研究結(jié)果或是產(chǎn)品制程，提高產(chǎn)品表達(dá)水平并易于純化。缺點(diǎn)1無血清培養(yǎng)基成本較高；2不是所有的細(xì)胞都能在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)；3細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中易受某些機(jī)械因素和化學(xué)因素的影響，培養(yǎng)基保存和應(yīng)用方面局限性很大。二細(xì)胞培養(yǎng)基的選擇細(xì)胞培養(yǎng)基的種類很多，如何選擇適宜的培養(yǎng)基是細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵。在此提供以下建議可供參考：1如果是新購(gòu)買的細(xì)胞，可以向細(xì)胞株的廠家咨詢，或者詢問引種來源查找細(xì)胞庫上對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)基；2根據(jù)細(xì)胞的特點(diǎn)及實(shí)驗(yàn)的需要來選擇培養(yǎng)基；3自己試驗(yàn)，用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，做生長(zhǎng)曲線，記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)速度，觀察細(xì)胞的形態(tài)變化，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇最佳培養(yǎng)基。培養(yǎng)基種類和細(xì)胞系并不是一個(gè)強(qiáng)制的對(duì)應(yīng)關(guān)系。具體培養(yǎng)細(xì)胞使用什么培養(yǎng)基，主要還是根據(jù)數(shù)據(jù)庫、文獻(xiàn)和經(jīng)驗(yàn)哦！
上一篇：細(xì)胞學(xué)堂 | 如何解決bEnd.3細(xì)胞形態(tài)變化、難消化
下一篇：細(xì)胞學(xué)堂 | 293細(xì)胞系家族譜系大揭秘
友情鏈接：丁香通???|??生物在線??|??ATCC? |??DSMZ??|??ECACC??|?Cellosaurus? |??JCRB?|??KCLB??|??RIKEN??|??中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心??|??中國(guó)國(guó)家實(shí)驗(yàn)細(xì)胞資源共享平臺(tái)Wuhan Pricella Biotechnology Co., Ltd.Copyright ? 2013-2023 武漢普諾賽生命科技有限公司 版權(quán)所有，并保留所有權(quán)利 鄂ICP備13016990號(hào)-1 地址：湖北省武漢市高新大道858號(hào)生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)園三期C4棟電話： 400-999-2100?郵箱：sales@procell.com.cn ?techsupport@procell.com.cn
鄂公網(wǎng)安備 42018502004018號(hào)
本司產(chǎn)品僅用于科研，不用于臨床診斷和治療
關(guān)注微信公眾號(hào)
首頁
電話咨詢
在線留言
關(guān)注微信
丁莎/胡文君
【 上海 】
凌晶
【 陜西 】
朱莎莉
【 湖北、河南 】
劉本佳
【 江蘇、安徽 】
章臣雄
【 廣東、云南 】
閤春喜
【 四川、甘肅、西藏 】
田博浩
【 重慶、吉林 】
石文平
【 北京、黑龍江、遼寧 】
任施博
【 江西、福建、新疆、海南 】
李榮楓
【 天津、河北、內(nèi)蒙古、山西 】
陳雨蘭
【 湖南、山東、寧夏、青海 】
尹國(guó)文
【浙江、廣西、貴州】
微信掃一掃咨詢
微信掃一掃咨詢
在線客服
關(guān)閉
在線咨詢
聯(lián)系銷售
技術(shù)支持
關(guān)注微信公眾號(hào)
×